实验三环境和人体微生物的检验及无菌操作技术教程.pptVIP

实验三 环境和人体微生物的检验及无菌操作技术 目 的 要 求 掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检测环境和人体中微生物的存在，体会微生物分布的广泛性。 学习无菌操作的技术，掌握平板划线分离微生物的方法。 实 验 原 理 自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的微生物集体群落。 每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同环境下微生物的数量、种类和特点。 实 验 材 料 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、察氏一号培养基； 土 样：地面以下5-10cm的土壤； 其 他：酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布棒、记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器。 制备土样悬浊液：称取土样1g，迅速倒入盛有99ml无菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌10-15min，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬浊液。 稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液0.5mL，放入4.5mL无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3～10-6的稀释液。 (注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。) 实 验 程 序 Ⅲ （标记、培养 ） 标记： 培养类别-组别- 样品类别-姓名 1、按培养基类别：细菌培养基--A，霉菌培养基--B 2、按4个大组：Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ、Ⅳ 3、按样品类别：10-5、10-6、口腔--a、鼻腔--b、 头发--c、空气--d 4、按个人标记：姓名 具体分工 结果与思考题 无菌倒平板时注意的事项有哪些？ 平板接种后为什么要倒置培养？ 通过本次试验你学到了什么？有什么体会？ * * 实 验 程 序 Ⅰ（无菌操作技术 ） 在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌固体培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/3~1/2或者覆盖皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无菌平板。 倒平板 实 验 程 序 Ⅱ （土样的稀释分离 ） 土样的稀释方法示意图 图1 从土壤中分离微生物操作过程 实 验 程 序 Ⅱ （环境及人体各部位取菌样 ） 共取六个菌样，分别为：口腔、鼻腔、 头发、空气和土壤稀释液中的10-5、10-6 两个稀释浓度（无菌吸管分别取0.2ml， 无菌操作加到平板上） 口腔: 将无菌平板打开适度开口，嘴对着开口咳嗽3-5次，使口腔中的微生物接种到平板中，将皿盖合上，放在桌面即可。 鼻腔：取一支无菌棉棒，放入无菌生理盐水中沾湿后，插入到鼻孔中转动一周，取出，在无菌平板上划线接种，取出棉棒，合上皿盖。 头发：将皿盖打开，轻拍头发，使头发中的微生物降落到平板表面，合上皿盖。 空气：选好地点后，打开皿盖，手托住平板，静止3-5分钟，使空气中的微生物自然降落到平板表面，合上皿盖。 10-5 、10-6的土壤稀释液：无菌移液枪分别取0.2ml，无菌操作加到两种平板上，每个稀释度做两套平板）。 培养： 将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养。霉菌保持25-27℃，3-5天；细菌35-37℃，1-2天。 8 7 6 5 4 3 2 1 小组成员 B B A 10-5 B B A 10-6 B B A 10-6 B B A 10-5 A B A 空气-d A B A 头发-c A B A 鼻腔-b A B A 口腔-a 培养平板 菌样 作土壤悬液 倒平板:12套A 12套B 备注 8 7 6 5 4 3 2 1 小组成员 B B A 10-5 B B A 10-6 B B A 10-6 B B A 10-5 A B A 空气-d A B A 头发-c A B A 鼻腔-b A B A 口腔-a 菌样 作土壤稀释液: 10-2、 10-3、 10-4、 10-5、 10-6、 倒平板:12套A 12套B