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微流控芯片实验室进展 微流控芯片免疫分析技术新进展L／ ’ 潘琼赵美萍’ 北京大学化学与分子工程学院分析化学所，北京，100871 微流控芯片操作平台以其灵活可控的多样化操作模式和高通量、高度集成的性能为传统 的免疫分析方法注入了新的生命活力，近年来从进样到分离、检测各个方面都取得了飞速的 发展，并在生物分子的分析领域显示出巨大的优势。 利用微流控芯片表面的非均相免疫分析，已成功建立了对食品中叶酸【l】、除草剂阿特 拉津12】、螺旋菌【3】、人甲状腺素[41等的检测方法。利用芯片上高通量检测的特性，Choi等采 用凝胶固定化多种抗体对牛奶中大肠杆菌(E．coil0157：H7)、乳链球菌、青霉素、链霉素和 体细胞含量以及pH同时进行了检测【5J。Kartalov等利用100个反应单元，同时对10个样品 进行了5次测定，检测限达到10 pM【6J。Gao等采用微流网络(I_t-FN)引入多种抗原进行表 面固定化，测定大肠杆菌的冻融抗原，检测限达到3 71。 i．tg／mLt 纳米金和纳米银由于颗粒大小易于控制、稳定性高、生物亲和性好，十分适于生物大分 子的标记检测。尤其是最近发现，一些亚微尺度(40．120rim)的金属颗粒粒径变化时，可 引起可见散射光波长的显著变化，且强度是常规标记物的10万倍之多，这种高灵敏度的优 势在微流控分析体系中更是得到了充分的发挥。Lin等利用共振光散射(RLs)技术检测微 流控芯片中的纳米金颗粒№J，检测限达到ng量级，样品消耗量大大减少，与常规使用的表 面增强拉曼散射光谱法相比，显著降低了检测成本。使用抗原或抗体包被纳米颗粒，利用纳 米颗粒的光学性质代替其他的标记物，实现了对羊抗人IgGl91的特异性检测。另有研究利用 包被过的纳米颗粒和微珠之间的特异性结合，依靠微珠在磁场中的偏转进行分离，检测了兔 和鼠IgC【lo】和IgE的浓度ll¨。磁纳米颗粒比表面大，可结合多个位点，同时在芯片上易于 操纵，缩短了分析时间，重现性也得到提高。梯度洗脱移界电泳则是利用分离通道中化合物 的电泳迁移与不同流速的逆流之间的相互作用，只有电泳速度大于逆流速度的样品可以进入 分离通道，使不同电泳速度的样品在非常短的通道中得到分离【l引。表1总结了近年来发展 的一些微流控芯片免疫分析的新方法。 。 表1．近年来发展的一些微流控芯片免疫分析新方法 检测原理 检测限(线性范围) 检测物质 Ikf 固定抗原，生物素连接一抗，利用纳米金标记的抗生物素抗体检测 10ng 螺旋菌和大肠杆菌 【8】 抗原包被纳米颗粒，抗体包被通道表面 10ng／mL 羊抗人IgO [91 15．6 磁泳免疫分析(抗体分别包被纳米颗粒和微珠，夹心法检测) ng／mL 兔IgG、鼠lgG [10l 268fM∞．021 磁泳免疫分析(抗人IgG抗体包被纳米颗粒．19E包被微珠) IU／mL) IgE 【11】 抗原结合的聚苯乙烯荧光微粒和抗体结合的CdTe量子点(QDs) 羊抗兔IgG 【12】 0．5-10Il咖L 作为荧光标记 50 胰岛素 梯度洗脱移界电泳 nmol／L(0-1gmol／L) 【131 光聚聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质