2.3动物的克隆规范.ppt

1、动物细胞培养 2、为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？ 有关概念: 将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增值。 植物组织培养和动物细胞培养的比较 动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。 （二）动物组织培养技术的发展 二、动物难以克隆的根本原因 分化的细胞核中物种的基因组完整，具有全能性，但基因组中的基因不同时进行活动，有的基因甚至不表达任何基因产物。 细胞分化使得细胞发生了基因的选择性表达，有的基因开放，有的基因关闭。体细胞基因组中的基因活动很不完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性。 动物基因组 一类基因：维持生存，各种细胞中都处于活动状态 一类基因：随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。 ★如何实现动物的克隆？ 三、核移植和动物的克隆繁殖 去 核 注 核 重组细胞 1、核移植： 利用一个细胞的细胞核（供体核）,来取代另一细胞中的细胞核，形成一个重建的“合子”（重组细胞），使发育成一个新的个体。 胚胎细胞克隆：使用的供体核来自胚胎 体细胞克隆：使用的供体核来自体细胞 1952年，罗伯特.布里格斯： 豹蛙→ 囊胚细胞核+去核的卵母细胞 → 发育成个体 1978年，童第周： 黑斑蛙→成体红细胞核→去核的卵细胞中→发育成蝌蚪 2、动物克隆繁殖： 胚胎细胞核移植成功率远高于成体细胞核移植。 克隆羊培育过程 黑面绵羊去核卵细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲融合 早期胚胎 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 体细胞核移植技术 体细胞克隆羊的培育成功，证明了什么？ 高度分化细胞经一定技术处理，也可回复到类似受精卵时期的功能。 在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细胞核（包括异源的细胞核）发育的作用。 （核质互作） 体细胞克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 1、核移植前对乳腺细胞的营养限制性培养（调节牛血清浓度）和电脉冲细胞融合技术，有利于核的变化和细胞融合后基因表达分子开关启动。 2、重组卵细胞最初分裂时虽然复制了DNA，但转录并未开始。 3、供体核DNA丢失了来源于乳腺细胞的阻止核基因表达的调节蛋白。 4、重组卵细胞开始第3次分裂时，原乳腺细胞的调节蛋白全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，核DNA被重新编排，胚细胞开始表达自己的基因，进而调控在代孕母亲子宫中的进一步发育。 * 动物细胞全能性的特点？ 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。 动物克隆的基础—动物的细胞和组织培养 （一）动物细胞、组织培养 将动物体内的一部分组织取出 分散成单个细胞 放在适宜的培养基培养 细胞得以生存并保持生命活动现象 生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等 机械消化或胰酶消化 （1）定义 离体动物细胞的生长特性： （1）贴壁生长： 悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。 （2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂。 （3）正常的生命活动： 生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象， 但不分化。 细胞贴壁过程 细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止。 接触抑制 2、适宜的环境条件 无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液 适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃ pH值：7.2-7.4 适宜的气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2） 适宜的渗透压等 培养条件 成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等 1、含全部营养物质的培养液 （2）动物细胞的培养过程 从动物胚胎或幼龄动物组织切片中取小片样品 转入特殊培养液 原代培养 分装到多个卡氏瓶中 传代培养 单个细胞悬浮液 CO2培养箱中保温培养 细胞系 机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶） 培养过程 动物组织细胞间隙中含有一定量的胶原纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 原代培养物 选择或纯化 选择或纯化 细胞株 细胞株 二氧化碳培养箱 通过在培养箱内模拟形成一个类似细胞或组织在生物体内的生长环境，如恒定的pH值（7.2-7.4）、稳定的温度（37°C）、