NY××××—××××1DB51T676—2007目次前言1范围2规范性.doc

目 次 前 言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 制样 1 3.1 样品的制备 1 3.2 样品的保存 1 4 测定方法 1 4.1 方法提要或原理 1 4.2 试剂和材料 1 4.3 仪器和设备 2 4.4 测定步骤 2 4.5 结果计算和表述 3 5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 4 5.1 灵敏度 4 5.2 准确度 4 5.3 精密度 4 附　录　A （资料性附录） 氯霉素特征离子质量色谱图、特征离子质谱图 5 前 言 本标准按GB/T1.1—2000 《标准的结构和编写规则》进行编制 本标准附录是资料性附录 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口 本标准由四川省质量技术监督局批准 本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所 本标准主要起草人：彭莉、岳秀英、 牛奶中氯霉素残留检测方法－ 高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法 范围 本标准规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）测定方法。 本标准适用于牛奶中氯霉素的残留量测定。检出限为0.05μg/L。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则 (ISO/IEC Directives, Part 3, 1997, Rules for the structure and drafting of International Standards, NEQ) GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法 农牧发[2003]1号 兽药残留试验技术规范（试行） 制样 样品的制备 取适量新鲜的空白或供试牛奶，涡旋混合使之均匀、密封。 样品的保存 -20℃以下冰箱中贮存备用。 测定方法 方法提要或原理 牛奶中的氯霉素用乙酸乙酯提取，正己烷脱脂，C18固相萃取柱净化，用，外标法定氯霉素标准品(C11H12Q5N2Cl2)不得少于97% 乙酸乙酯 乙腈 色谱纯 色谱纯正己烷g，用溶解并成浓度为100μg/mL的标准备液，置-20℃保存，保存期不超过。取，用稀释成浓度为置4℃冰箱中保存，保存期不超过4%的氯化钠溶液 称取40.0g氯化钠，加水稀释成1000mL,摇匀即得。 Waters Sep-Pak Vac C18固相萃取柱或相当者 500mg，3 mL。临用前分别用5mL甲醇5mL水实验室常规仪器设备 天平 感量0.01g 分析天平 感量0.00001g 漩涡混合仪 振荡器 组织匀浆机 冷冻离心机 固相萃取装置 旋转蒸发仪 氮吹仪 离心管 50mL、20mL 微孔滤膜 0.22μm 测定步骤 试料的制备 试料的制备包括： ——取冷冻样品于室温解冻，将解冻后的样品于-8℃，6000r/min离心2min，作为供试样品。 ——取冷冻空白样品于室温解冻，将解冻后的空白样品于-8℃，6000r/min离心2min，作为空白样品。 取空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加样品。 提取 取10.0mL供试样品，置50mL离心管中，加20mL乙酸乙酯，15min，000r/min离心1min，将乙酸乙酯层移鸡心瓶中。再20mL乙酸乙酯合并乙酸乙酯提取液鸡心瓶中，于4℃水浴中减压旋转蒸发至干。4%氯化钠溶液于鸡心瓶中，充分旋涡溶解残留物，加5mL正己烷振荡混合1min，，去正己烷。再加5mL正己烷用5mL甲醇、5mL水淋洗活化C18柱，弃掉洗涤液。用5mLmL甲醇μm滤膜过滤，滤液供高效液相色谱-串联质谱仪测定。 标准曲线的制备 准确量取用氮气吹干μg/L、0.50μg/L 、1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L的系列标准工作溶液，供高效液相色谱-串联质谱仪测定。 测定 液相色谱条件 色谱仪：Waters_2695高效液相色谱仪或相当者 色谱柱：AtlantisTM C18 (2.1mm×150mm，5μm) 或相当者 柱温：30℃ 流速：0.2mL/min 进样量：20μL 运行时间：15min 流动相：A：乙腈，B，水 GradienTable Time(min) Flow Rate(mL/min) A(%) B(%) Curve Initial 0.2 20 80 1 6