第五章食用菌菌种生产规范.ppt

（一）目的不同的菌种 1、保藏用种：指用于中、长期保持菌种的生活力和原有性状的菌种。 2、实验用种：供实验室进行科学试验、研究的菌种。 3、生产用种（商业菌种）：供食用菌大面积栽培使用的菌种。 制种程序 ①营养液制作　a　准备工作 三、培养基的灭菌 母种转管无菌操作程序： 1.将接种用品及原始母种放入接种箱内。 2.用菇保1号、气雾消毒盒（2g/m3）或甲醛进行熏蒸，时间要在30分钟以上。 3.手、台面、接种工具、试管用酒精棉球擦试消毒。 4.点燃酒精灯，火焰灼烧接种镐至烧红后冷却，凡能伸进试管的杆部均过火灭菌。 5．左手大拇指和其他四指并拢握住菌种管和待接试管，斜面向上，并保持水平。 6．右手小指、无名指及手掌拔掉棉塞，用火焰灼烧试管口并不断搅动。 7．先弃去前端1cm处，然后用接种镐快速移取黄豆粒大小的菌种入待接试管斜面培养基中央。 ④培养纯化：适温下培养2-4天，可看到组织块上长出白色绒毛状菌丝体，移接到新的培养基上再经过5-7天适温培养，长满试管后即为纯菌丝体。 ⑤出菇试验：将分离得到的试管种扩大繁殖，并移接培养成原种、栽培种,做出菇试验,选出出菇好、产量高、质量好的，即可作栽培生产用种。 b胶质菌类组织分离法： ①一种方法是将耳片反复用无菌水冲洗，切成0.5cm，小块移入培养基，于28℃下进行培养； ②另一种方法是剖取尚未展开耳片的耳基团内的组织块进行分离。 （2）菌核分离法：一些药用菌如茯苓、猪苓、雷丸都有菌核。进行组织分离时，采用含浆汁多的菌核。在无菌的条件之下，将菌核剖开，于菌核的附近，剖取蚕豆大小的菌核组织块移入斜面培养基上，在26-30℃下培养。 （3）菌索分离法：从菌索中分离培养得到纯菌丝体的方法。 2、木腐菌基内菌丝分离 ①把分离用菇木的部分或全部的表面在火焰上轻燎。 ②取小刀在火焰上灭菌，对准菇木上菇柄（耳基）的着生位置切成两半。 ③确定欲分离菌丝在菇木上的位置，再次用火焰灭菌过的小刀，在欲分离部位刻划数个井字。 ④用火焰灭过菌的接种钩，钩取一小块木屑（绿豆大小或更小）移接于斜面培养基。 ⑤接种后将试管置于25—27℃下培养，促使其恢复。近风干的种木内菌丝常处于休眠状态。接种后，种木吸湿，菌丝逐渐恢复生长。如果短期时间内分离物未曾发，则可保留至4周后，再断定分离是否成功。 3.孢子分离(有性繁殖）孢子分离主要是指利用子实体上产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法。分为多孢分离与单孢分离两种。 空中孢子捕捉法:伞菌的孢子大量弹射时，子实体周围可以看到“孢子云”，可以在其漂去的上方倒放琼脂平板，使孢子附在其上，再盖上盖，用塑料胶水纸封好培养，整个过程要快。 褶上涂抹法:取成熟伞菌，切去菌柄基部，带入接种箱内，先表面消毒，用接种针插入两片菌褶之间，轻轻抹过表面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。 帖褶法:取一小块成熟的菌褶或菌盖，用熔化的琼脂或胶水、糨糊之类，帖附在试管斜面的正上方试管壁上或培养皿皿盖上，经6-12小时，待孢子落下后，立即把试管或培养皿中的培养基转到另一消毒过的空白试管或培养皿中进行培养。 单孢分离:从收集到的多孢子中将单个孢子分离出来，分别培养，作为育种的材料。 1.涂抹法：用已沾湿无菌水的接种针，从孢子印上沾取孢子，在无菌条件下，插入盛用无菌水的小试管内振荡稀释成适宜浓度的孢子悬浊液。随后无菌条件下划线培养。 2.梯度稀释点样法:用同样的方法制成浓度较高的孢子悬浊液。同时取灭菌过的空试管数根，排序编号。按无菌操作规程获得一系列的不同浓度梯度的孢子悬浮液。再用毛细管在各个梯度孢子液中取样培养，单孢萌发后菌丝便长入小培养基块中，再将其转移到试管斜面上培养获得单孢培养物。 （一）母种质量的鉴定 一般分离培养以及引进的母种，都应严格控制转管的次数，最多不要超过5次。同时要考虑其菌龄，随着培养时间的延长，菌龄越来越大，生活力随之降低，菌种老化。 母种质量标准 外观肉眼鉴定 肉眼观察包装是否合乎要求，棉塞有无松动，试管有无破损，有无病虫害等。外表菌丝洁白、粗壮、富有弹性、则生命力强。如有淡茶褐色的菌膜及子实体，，只要接种时去除就可以用，若菌丝已干燥、收缩或菌丝体自溶产生大量红褐色液体，则表明生活力下降，不能作为菌种。 菌丝生长速率测定 　　将所获的菌种，转接至PDA 培养皿中央, 待菌丝生长蔓延时, 用直径0.5cm的打孔器,经灭菌后打取边缘菌丝,连同培养基重新接入PDA 培养皿中央进行培养,每隔24小时,测定菌落直径,直至菌落覆盖全皿为止,从而计算出菌丝平均生长速度。 显微镜检查 在载玻片上滴一滴蒸馏水，然后挑取少许菌丝置水滴上，让菌丝体充分展开，盖好玻片，在显微镜下观察。蘑菇菌丝体应粗壮，菌丝节较长，呈分枝状，说明是正常菌种，如