抗HIV药物筛选研究.pdf

2006年I1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 抗HIV药物筛选研究 喻昕”，郑璩1，王静晖1 CarloDeGiuli Zanott02 Morghen2，AntoniaRadaelli2，Carlo ofMolecular ofMedical (1．武汉大学药学院，武汉430072；2．LaboratoryVirology,DepartmentPhamacology, Milan University,Vanvitelli32，Milan20129，Italy) 在与艾滋病抗争的过去几十年内，抗艾滋病药物也得到了发展。目前针对艾滋病的预防性及 治疗性疫苗都在研制中，有的已经有了一定进展，但要完全成功可能还需时日。迄今为止，艾滋 病治疗的最佳策略仍然是使用抗病毒药物，主要是使用鸡尾酒疗法的HAART治疗，可以将艾滋 病人血液病毒载量降低难以检测的程度，且有报道指出，通过HARRT治疗，有些病人免疫系统 得到了重建。在HAART治疗药物中，重要的几类药物分别是逆转录酶抑制剂(核苷类及非核苷 www．tibotec．hiv．corn以及hiv—web．1anl．gov／content／index)。 本文主要研究端粒酶抑制剂类药物用于抗HIV药物的可能性。本文所使用的四种端粒酶抑 FCS、IL．220U／mL、15mM 养条件相同。 首先使用MTT法测定药物对PBMC的细胞活性的影响，接着选择对细胞活性影响较小的药 物浓度，测定药物对HIV的抑制作用。 MTT法测定四种端粒酶抑制剂的结果如 图1所示。 由图知道，当TRI．001、TRl-002、TRl—003 的浓度小于50rayl，而TRl-005的浓度小于 300ram时，药物对细胞的活性影响较小。因 此选择分别为50、50、50和3001xM浓度下各 药物对艾滋病病毒抑制作用，考虑到SHIV与 1NNOTESTTMHIV HIV的相似性，这里采用SHIV作为PBMC感染病毒，采用P24 Antigen mAb(INNOGENETICSN．V公司生产的ELISA试剂盒)检测细胞培养上清中P24产量以确定。 上清，向细胞中加入4I_tg／mL SHIV (编号为261)，阴性对照中不加任何药物和病毒，阳性对照中仅加入SHIV，同时加入对应的药 物以达到相应的药物浓度。于培养箱中感染1小时后，离心除去上清。接着以培养基洗涤三次， 最后加入含有相应药物浓度的培养基500皿(阴性和阳性对照中均不含药物)，培养条件同上， ’通讯联系人 2006年i1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 1。 塞!兰：旦燮Q堡墨!!：望∑墅堕璺塑望堡垒丝型笙墨 PBMCinfectedwithSHIV Absorba／iceat450nm NegativeControl(1：20SN) 0．040 Positive 1．368 Control(1：20 SN) TRl—001(50口m)(1：20SN) 1．226 TRl—002(50Vqm)(1：20SN) 1．275 TRl—003(50口m)(1：20SN) 1．421