抗真菌抗生素抑霉菌素研究.pdf

抗真菌抗生素抑霉菌素研究 施跃峰 桑金隆 竺利红 李孝辉 吴吉安 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所 杭州 310021 摘要 抑霉菌素产生菌经形态学特征及生理生化特性等分类学研究 定名为刺孢吸水链霉菌天目山亚种 主要活性组分经UV H NMR DEPT CNMR 及H-H COSY 等光谱分析论证 推知其化学结构系一新的 核苷类抗生素 采用二倍稀释法对其展开体外抗菌活性研究 结果表明抑霉菌素对白色假丝酵母 担子 菌 圆形刺盘孢等多种农作物真菌病害病原菌具有强生长抑制作用 关键词 抑霉菌素 菌种鉴定 化学结构 抗菌谱 抑霉菌素是我们筛选到的一种新的农用抗真菌抗生素 经国家 863 计划立项资助 已完成新农药 开发多方面基础研究 表现出高效 安全的特点 本文报道抑霉菌素产生菌分类鉴定 活性物质分离 结构论证及体外抗菌活性研究等方面的试验结果 1.材料与方法 1.1 产生菌分类鉴定 抑霉菌素产生菌菌株 HA-8416 分离自杭州天目山地区土壤 其形态学特征及生理生化特性等分 类学研究 采用 链霉菌鉴定手册 等文献所述方法进行[1-3] 1.2活性物质分离和化学结构 阳离子交换树脂采用杭州争光化工厂生产,型号001×7 硅胶采用青岛海洋化工厂生产 H型 100 目 H NMR DEPT CNMR 及H-H COSY 均采用D O 作溶剂 在Varian AM-500 核磁共振仪上进行测 2 绘 1.3 体外抗菌活性研究 采用二倍稀释法 细菌用肉膏-蛋白胨培养基 于37 培养24 小时 真菌用Sabourand 培养基 于28 培养48小时 观察结果 2.试验结果 2.1产生菌分类鉴定 1 HA-8416菌丝及孢子形态见图1和图2 与链霉菌属相关已知种比较 与不吸水链霉菌( ) 吸水链霉菌(S.hygroscopicus)比较相似 但有显著差异 不吸水链霉菌不吸水 HA-8416有吸水现象 吸水链霉 菌孢子表面光滑 而HA-8416的孢子表面有细刺 它与刺孢吸水链霉菌(S. hygrospinosusSF-104)更为相似 但 在某些培养特征 生理生化特性上又略有区别 前者牛奶不凝固 不产硫化氢 硝酸盐不还原 后者牛奶微凝固 微产硫化氢 硝酸盐弱还原 前者可利用蜜二糖 后者不能 另外 二者在各种培养基上气丝和基丝颜色也有所不 同 产生的抗生素也不一样 因此 菌株HA-8416应属刺孢吸水链霉菌的亚种 命名为刺孢吸水链霉菌天目山亚种 [4] (Streptomyces hygrospinosus vartianmushanensis n.var.Sang et al) 图1 链霉菌 HA-8416菌丝形态 1600 图2 链霉菌 HA-8416孢子形态 15000 Fig. 1 Mycelium morphology of HA-8416 1600 A- × 2.2活性物质的分离和化学结构 抑霉菌素产生菌发酵液 经阳离子交换树脂吸附提取 硅胶柱层析分离及制备型硅胶薄层层析纯 化即得纯品 具体流程见下图 发酵液 阳离子交换树脂吸附,2N 氨水洗脱 粗提物 硅胶柱层析,洗脱剂丙醇:水(9:1) 抑霉菌素粗品 制备型硅胶薄层层析, 展开剂丙醇:水(8:2),R0.35 f 富含抑霉菌素硅胶