新城疫病毒感染鸡腺胃中NDV、P物质和VIP的分布及动态观察.pdf

新城疫病毒感染鸡腺胃中NDV、P物质和VIP的 分布及动态观察 逝云连，余锐萍’， 杨玉荣，刘天龙 (中国农业大学，北京100094) 摘要：35日龄SPF鸡随机分成对照组和攻毒组。攻毒组用鸡新城疫病毒腹腔注射急性人工感染后，分别取腺胃， 并用免疫组织化学方法检测组织中NDV、P物质和VIP的分布及动态变化。结果表明：P物质和VIP在两组鸡的腺 胃中都有存在，且三种物质的表达量呈现正相关性，其含量在感染后有增加，证明了P物质和VIP在鸡感染NDV后 有调节动物防御系统的作用 ． 关键词：ND：免疫组织化学：腺胃；P物质；VIP 新城疫(Newcastledisease，ND)是由副粘病毒引起的禽类的一种急性、高度接触性的传染病， P) 主要侵害神经系统、呼吸系统和消化系统，给养禽业造成了很大的经济损失。P物质(substance 和VIP(Vasoactiveintestinal peptide)是两种重要的脑肠肤类物质，对于机体的生理功能和免疫功能 有重要的调节作用，但是关于鸡感染NDV后，P物质和VIP这两种脑肠肽在鸡ND的发生发展中起 何作用，还未见有报道。本研究采用免疫组织化学方法，对人工感染NDV后鸡腺胃组织中的NDV、 P物质和VIP的含量及其分布进行了动态观察，以探讨P物质和VIP在鸡新城疫发病过程中的作用。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1实验动物’健康的35日龄的SPF自来杭鸡，购自中国兽医药品监察所实验动物中心。 1．1．2NDV毒株新城疫F48E9标准株，购自中国兽药监察所。 1．1．3试剂新城疫标准阳性血清购自中国兽药监察所；辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡kG由军事 司产品：SP9000试剂盒购自ZYMED公司产品；DAB显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1．2动物分组35日龄SPF自来杭鸡80只，随机分为对照组和攻毒组，每组40只，对照组腹腔注 射灭菌生理盐水0．1ml／只，攻毒组腹腔注射新城疫F48E9标准毒株1000倍稀释液O．1ml／只。 60h、72h和84h剖杀对照组和攻毒组鸡各五只摘取腺胃10％福尔马林液固定后，制作石蜡切片。 1．4免疫组织化学染色 1．4．1 N】W’的免疫组织化学染色(间接法)a．石蜡组织切片脱蜡至水，入蒸馏水2min；b．3％双氧水室 染，常规脱水封片。‘ 1．4．2P物质和VIP的免疫组织化学染色(SP法)a～d步骤同上；e．滴加兔抗P物质多克隆抗体／ 8min后，蒸馏水冲洗；m．苏木素染液衬染，常规脱水封片。 1．5结果判定和数据分析在免疫组织化学染色后的组织切片中阳性反应信号为黄色或棕褐色着 国家自然科学基金30471301)资助 作者：尚云连(1980)，女，基础兽医专业在读硕士，研究方向；肠道粘膜免疫和分子病理学 通讯作者：余锐萍，中国农业大学动物医学院教授，博士生导师。 246 染，阴性反应细胞核呈浅蓝色。随机选取腺胃的深层复管腺5个不同的视野用Motic数码显微镜 将取得的数据用SPSSl2．0统计软件进行统计分析。 2结果 2．1NDV、P物质和Ⅷ在腺胃中的分布 2．1．1 NDV在腺胃中的分布对照组的切片呈阴性，攻毒组中观察到NDV散在的分布于整个腺胃组 织，在深层复管腺中表达量较高(附图A)。 2．1．2P物质在腺胃中的分布对照组中P物质阳性细胞主要分布于深层复管腺细胞(附图B)，粘 膜上皮细胞细胞核周围的胞浆中有少量分布。攻毒组除了深层复管腺和粘膜上皮细胞有阳性物质外， 在浅层单管腺、小静脉游离面和固有层有阳性物质出现。 2．1．3VIP在腺胃中的分布对照组中阳性物质主要分布于深层复管腺细胞(附图D)和粘膜上皮 细胞胞浆中，浅层单管腺，固有层中和淋巴组织的淋巴细胞周围有阳性细胞分布。攻毒组除以上部 位中可观察到阳性细胞外，在小静脉的游离面也有阳性物质。 2．2 NDV、P物质和VIP在腺胃中含量的动态变化 2．2．1NDV在腺胃中的含量变化鸡感染NDV病毒后，腺胃中各部位NDV免疫组化阳性反应信号 随感染时间的延