第一章组织培养技术的基本理论知识绪论.ppt

小结： 体外培养细胞的生长类型 粘附型细胞 悬浮型细胞：血细胞以及某些肿瘤细胞 上皮型细胞 成纤维型细胞 游走型细胞 多形型细胞 培养细胞分化状态的变化 分化特征逐渐减弱，原本各种各样的分化细胞，逐渐失去各自的形态与功能“个性”，表现出某种趋同性，这种现象被称为去分化或脱分化 培养细胞的增殖能力 分裂增殖和生长发育是体外培养细胞的两大生命特征;增殖能力一般与该种细胞在体内的增殖能力相仿。 二、培养细胞的生长和增殖过程 １）单个细胞的生长过程：ＤＮＡ合成 　　　　　　　　　　　　细胞分裂 　复习：细胞周期＝Ｇ１＋Ｓ＋Ｇ２＋Ｍ ２）培养细胞的生长过程　原代培养期 　　　　　　　　　　　　传代期 　　　　　　　　　　　　衰退期 细胞周期(Cell cycle )： 指细胞从前一次分裂结束开始至本次分裂结 束所经历的过程。常分为4个时期，即DNA 合成期（S期）、有丝分裂期（M期）、有 丝分裂完成至DNA合成开始的间隙期（G1 期）以有DNA复制结束至有丝分裂开始的间 隙期（G2期）。若某种原因（如乏氧、血 清饥饿等）细胞不再沿细胞周期运行，而进 入休眠状态，则称为G0期。 体外培养细胞的整个生命活动过程分期 原代培养：取自体内新鲜组织并置于体外 条件下生长的细胞在传代之前称为原代培 养。 传代培养：细胞在培养器皿中生长一定时 间后，被分开接种到新的培养器皿中继续 培养的过程。 　原代培养　　　　　　　传代培养 选取生长良好的细胞 加入胰蛋白酶消化液 镜下观察 倒去酶液，加入培养液反复吹打制成细胞悬液 按比例分装后培养  2)每代贴附生长细胞的生长过程 游离期 贴壁期 潜伏期 对数生长期 停止期（平台期） 1.游离期： 细胞接种后在培养液中呈悬浮状态，也 称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆 球形。 时间：10分钟一4小时 2.贴壁期： 　细胞附着于底物上，游离期结束。 　底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等 3.潜伏期 　此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。 4.对数生长期： 　细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。 5.停止期（平台期）： 　细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度限制 每一代细胞的生长过程分期 第三节　培养细胞的生存环境与条件 １．细胞的营养需要： 　１）基本营养物质： 　　　氨基酸（１２种＋谷氨酰胺） 　　　维生素 　　　葡萄糖、核糖、脱氧核糖等　　　 　　　无机离子等 　２）促细胞生长因子：多由血清提供 　 ２．细胞的生存环境 １）温度条件对细胞生长的影响 不同生物来源的组织细胞培养温度不同；体外培养动物细胞最常用的温度是37℃。 耐低温不耐高温！ 　在生理温度范围内，温度与细胞生长率之间存在正相关关系。（复习：温度对酶促反应的影响） ２）气相环境对细胞生长的影响 动物细胞培养的气相环境都是采用5%CO2与95%空气（提供氧）的混合气体。 　Ｏ2参与细胞的能量代谢过程。 　ＣＯ2用于维持培养液的酸碱度。 　 　一般多为开放式培养 ３）培养液的酸碱度对细胞生长的影响 大多数的有机体细胞能在pH6.0～8.0的环境中生存。最适宜的pH值范围是7.2～7.4。 体外培养的正常细胞耐酸能力要强于耐碱能力 ４）无污染、无毒（前提条件！） 组织培养常用术语 Cell culture (细胞培养) ：细胞（包括单个细胞）在体外条件下的生长，称为细胞培养。在细胞培养中，细胞不再形成组织，但在实验室口语中，人们常将它扩展至组织培养与器官培养。 贴壁依赖性：为细胞需贴附于底物或支撑物上才能生长的性质。 Primary culture (原代培养)：从体内取出细胞或组织的第一次培养 Passage (传代或传代培养) 将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。 Suspension culture（悬浮培养） 细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖的一种培养方式。 Cell fusion （细胞融合）在体外培养条件下，经化学试剂、病毒或物理方法诱发，使两个独立的细胞融合成一个细胞。 Confluent (汇合)：细胞相互连接成片占据所有底物面积。切勿与细胞融合相混淆。 Sub-confluent（近汇合）：细胞在底物上生长接近，但尚未完全汇合。 Cell line（细胞系）原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。如果不能继续传代或传代数有限,可称为有限细胞系，如可连续传代，则可称为连续细胞系 。 Clone (克隆)： 单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，它们的遗传特性相同。 Cell strain (细胞株