生物工业下游技术第七章反胶团萃取法重点.ppt

第七章 反胶团萃取法 谢 虹 第一节 概 述 反胶团萃取 其主要原因有两个：一是被分离对象－蛋白质等在40-50℃便不稳定，开始变性，而且绝大多数蛋白质都不溶于有机溶剂，若使蛋白质与有机溶剂接触，也会引起蛋白质的变性；二是萃取剂问题，蛋白质分子表面带有许多电荷，普通的离子缔合型萃取剂很难奏效。 反胶团溶液的概念：反胶团溶液是透明的、热力学稳定的系统。反胶团是两性表面活性剂分散于非极性有机相中亲水性基团自发形成的内含微小水滴的、空间尺度仅为纳米级的聚集体。所以表面活性剂是反胶束溶液形成的关键。 第二节 反胶团的形成 一、反胶团的构造 具有分子识别并允许选择性透过的半透膜功能； 在疏水性环境中具有使亲水性大分子保持活性功能。 将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶团浓度(CMC)时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体，在通常情况下，这种聚集体是水溶液中的胶团，称为正常胶团(normal micelle)。 在胶团中，表面活性剂的排列方向是极性基团在外，与水接触，非极性基团在内，形成一个非极性的核心、在此核心可以溶解非极性物质。 此极性核具有溶解极性物质的能力，极性核溶解水后，就形成了“水池”(water pool)。当含有此种反胶团的有机溶剂与蛋白质的水溶液接触后，蛋白质及其他亲水物质能够通过螯合作用进入此“水池”。 由于周围水层和极性基团的保护，保持了蛋白质的天然构型，不会造成失活。蛋白质的溶解过程和溶解后的情况示意于图中。 三、反胶团的物理化学特征及制备 1.反胶团的物理化学特征 反胶团的含水率W W＝C水/C表 W越大，表示反胶团的半径越大。 2.反胶团的制备 注入法：将含有蛋白质的水溶液直接注入到含有表面活性剂的非极性有机溶剂中，然后进行搅拌直到形成透明的溶液。过程快，较好的控制反胶团的直径和含水量。 相转移法：将含有蛋白质的水相与含有表面活性剂的有机相接触，在缓慢的搅拌一部分蛋白质转入有机相。过程较慢，可在有机溶剂相中获得较高的蛋白质溶液。 溶解法：将含有反胶团的有机溶剂与蛋白质粉末一起搅拌，使蛋白质进入反胶团。对非水溶性蛋白质可用此法。 第二节 生理活性物质的分离浓缩 四种反胶团溶解蛋白质模型 (a)为水壳模型，蛋白质位于水池的中心，周围存在的水层将其与反胶团壁(表面活性剂)隔开； (b)蛋白质分子表面存在强烈疏水区域，该疏水区域直接与有机相接触； (c)蛋白质吸附于反胶团内壁； (d)蛋白质的疏水区与几个反胶团的表面活性剂疏水尾发生相互作用，被几个小反胶团所“溶解”。 表面性质不同的蛋白质可能以不同的形式溶解于反胶团相，但对于亲水性蛋白质，目前普遍接受的是水壳模型。 学习要求 反胶团有哪些有用的特征可用于生物物质的分离？ 将反胶团萃取技术与其他蛋白质分离技术相比较，指出它们各自的适用场合？ 影响反胶束萃取蛋白质的主要因素？ 从毛发中提取胱氨酸 胱氨酸是白色六角形板状晶体或结晶粉末，不溶于乙醇、乙醚，难溶于水。易溶于酸、碱溶液，但在热碱溶液中可被分解。 胱氨酸比半胱氨酸稳定，在体内转变成半胱氨酸后参与蛋白质合成和各种代谢过程，有促进毛发生长和防止皮肤老化等作用。 临床上用于治疗膀胱炎、各种秃发症、肝炎、神经痛、中毒性病症、放射损伤以及各种原因引起的巨细胞减少症，并是治疗一些药物中毒等的特效药。在食品工业、生化及营养学研究领域也有广泛的应用。 胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马毛、羽毛及动物角等的蛋白质中，其中人发含量最高，达17.6％。胱氨酸是氨基酸中最难溶于水的一种，因此可利用这种特性，通过酸性水解，从废杂猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋白中，分离提取胱氨酸。 操作步骤 清洗：除去废杂毛内混杂的泥沙、石块、草木、铁杂物等，用60°C左右的热水，加少量洗涤剂，搅拌洗涤4～6分钟，洗去吸附在杂毛上的油脂，然后捞出，再用清水冲洗干净，滤干，放在通风处晒干或烘干备用。 按废杂毛的量，先量取2倍30％工业盐酸，加入到玻璃钢或搪瓷水解罐中，通蒸气加热到70～80℃，立即投入已清洗晒干的废杂毛适量，继续加热，间隙搅拌，使温度均匀。 升温到100°C时开始记温，每隔半小时记温1次，在1～1.5小时内升温至110℃左右(即罐温)，以后继续维持罐压14.7千帕(气压490千帕)，水解13个小时左右(用玻璃钢盘管加热，水解时间可缩短为6～7小时)，水解期间要有回流装置，保证水解酸度，使水解更完全。水解时间可从水解罐内溶液温度达100°C时计算起。 水解完全后，停止回流(回收的盐酸可重用)，立即趁热过滤。这时过滤很困难，应先用玻璃布抽滤除去大的黑腐质，然后再用双层纱布抽滤，将滤液移到中和锅或缸中，滤液用1:1的盐酸冲洗2～3次，冲洗液一并倒入中和锅或缸内，准备中和。 将过滤好的滤液趁