基因工程的基本操作工具分解.ppt

基因工程的理论铺垫 艾弗里：证明ＤＮＡ是遗传物质 沃森和克里克：阐明ＤＮＡ双螺旋结构 尼伦贝格：破译遗传密码 1.以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键 2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA 3.有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 5、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA　　 D．限制酶只存在于原核生物中 6、DNA连接酶催化的反应是( ) A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B．黏性末端碱基之间形成氢键 C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D．A、B、C都不正确 7、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是( ) A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件 D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选 8、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是 ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A、①③⑤⑦ B、②④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ 9、在受体细胞中能检测出目的基因是因为( ) A、目的基因上有标记 B、质粒具有某些标记基因 C、重组质粒能够复制 D．以上都不正确 10、关于质粒的叙述正确的是( ) A、质粒是能够自我复制的环状DNA分子 B、质粒是唯一的载体 C、重组质粒是目的基因 D、质粒可在宿主外单独复制 11、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是 A、①② B、①③ C、①④ D．②③ 12、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是 (1)限制酶(2)连接酶(3)解旋酶(4)还原酶 A、(1)(2)(3) B、(1)(2)(4) C、(1)(2) D、(1)(3) 13、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，分析回答问题。 (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个DNA分子，所用DNA连接酶通常是 。 (2) 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用DNA连接酶通常是 。 C D C A B A B C ③ 平 T4DNA连接酶 ② ④ 黏性 E·coli DNA连接酶 基因克隆操作 基因工程的操作步骤有哪些？各个步骤如何进行？看书P12 目前被较广泛提取使用的目的基因有： 苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因操作的基本步骤 (一）提取目的基因 将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 提取目的基因的方法 ⑴直接分离基因(从基因文库中获取）——鸟枪法 　　将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 ⑵人工合成基因法 有两种方法：　　　 ①直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 DNA合成仪 （3）利用PCR技术扩增目的基因 P14 ②逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 质粒 DN