毛细管点泳.ppt

毛细管电泳刘林娜 电泳 毛细管电泳（CE） 毛细管电泳（CE）分离 毛细管电泳仪基本结构图 毛细管电泳在蛋白质分析的应用 　 　　　　　　　　电泳 　　带电悬浮颗粒或大分子在一定介质中因电场作用而发生移位运动的物理化学现象。 颗粒或大分子的迁移速率取决于电势差、颗粒带电量和颗粒大小、形状。 　1937年瑞典化学家Tiselius蒂塞利乌斯运用电泳成功分离血清蛋白，获得1948年诺贝尔化学奖，开创了电泳技术的新纪元。 毛细管电泳（CE） 以毛细管为分离通道，高压直流电场为驱动力的新型液相分析技术。 　可将有生物化学意义的复杂化合物在不改变其性质的前提下进行分离． 应用：蛋白质分离、糖分析、DNA测序、手性分离、单细胞分离。 毛细管电泳（CE）分离 开始阶段，样品自由迁移，位置由速度决定 组分分开后，位置由介质性质决定 自由迁移 电泳介质 不连续介质：由前导(TE)＋终末(TE）电解质组成。 　　　　　　各组分分开形成的区带按速度大　　小排列，区　　　　　　 　　　　　　带与LE，TE都以　　等速前进。 连续介质：区带相互分开，以各自速度独立迁移. PH梯度：弱解离样品变速迁移－－按平均速度分析。两性样　　　 　　　　　品在PH＝PI（等电点）位置，没有净电荷，不受电　 　　　　　场作用　　　　.分离区带停止在各自对应的等电点　　 　　　　　位置上。 毛细管电泳仪基本结构图 检测方法 紫外吸收、激光诱导荧光 数据记录 参量：峰面积、峰高、峰间距 毛细管电泳在蛋白质分析的应用 分子量的测定 等电点的测定 肽谱分析（指纹图）测定蛋白质的 一级结构 迁移率的测定 　　 等电点的测定原理 蛋白质有特定的氨基酸组成,因此有特定的等电点pI,是一种物化常数.各种蛋白质的等电点可以分布在很宽的范围,低者可达pH1.5,高者可超过pH12,以此在PH介质梯度用于蛋白质的分离和鉴定. 常用的有蛋白质的等电聚焦,和分子量测定类似,用标准工作曲线法. 参考书目 《诺贝尔奖讲演全集》 《诺贝尔奖讲演全集》编译委员会编译 福建人民出版社 《电泳》何忠效，张树政主编 北京：科学出版社，1999 《毛细管电泳技术及应用》 陈义编著 化学工业出版社 《高效毛细管电泳 》 邓延倬,何金兰编著北京：科学出版社，1996 * * * * 组分沿毛细管轴的速度V 一定时间t所迁移距离L 定长分离：固定位置安装检测器记录分子通过该位置的情况(tR)，可得图形信号－－电泳谱图 先测出标准蛋白，如左图显示了由214nm紫外吸收检测得到的谱图，由此可以求算出如下图分子量－迁移时间工作曲线图或计算出回归曲线方程 再测未样品的tR ，然后在工作曲线下进行标准比较． 标准曲线法