第八章催化水解反应的金属酶重点.pptVIP

第八章 第一节 概 述 第二节 羧 肽 酶 第三节 碳 酸 酐 酶 第一节 概述 根据酶催化反应的类型，把酶分为六类 ： 氧化还原酶类 催化氧化还原反应 转移酶类 催化功能基团转移反应 裂解酶类 催化从底物移去一个基团而留下双键的反应或其逆反应 异构酶类 催化异构体互相转变 合成酶类 催化双分子合成一种新物质同时使ATP分解的反应 水解酶类 催化水解反应 一、水解酶 六大酶类之中研究的最多并应用最广泛的一类，其中有不少水解酶的活性与金属离子有关。 后页表中列出若干水解金属酶和金属离子激活酶。 金属离子激活酶是指必须加入金属离子才具有活性的酶。 根据作用方式，肽酶又分为肽链端解酶和肽链内切酶。肽链端解酶从肽链羧基末端和氨基末端切下氨基酸，前者称羧肽酶，后者称氨肽酶。 内切酶是另一类肽酶，用于切断蛋白质分子内部肽键使之变成小分子多肽，如嗜热菌蛋白酶。 酯酶催化酯键水解，其中羧酸酯酶催化羧酸酯水解 RCOO—R’ + H2O → RCOOH + R’OH 磷酸酯酶催化磷酸酯键水解 O O ‖　　　　　　　　　　 ‖ RO―P―OR’ + H2O → RO― P―OH +R’OH 　　 |　　　　　　 | OH 　　　 OH 水解金属酶之中很多都与Zn2+有关。 其次：Ca2+、Mg2+，还有少数酶含Mn2+ 由于水解过程不发生电子转移，所以金属离子的氧化态在催化过程中不变化。 二、水解金属酶研究中的过渡金属离子 EPR、M?ssbauer、d-d电子光谱－金属酶存在某种过渡金属。 Zn2+,Ca2+,Mg2+等离子不具有未充满的d轨道，因此含有Zn2+,Ca2+,Mg2+等离子的金属酶就难以应用上述检测技术获得有用信息。 为了深入研究金属酶的性质，通常采用探针。一般采用Co2+代替Zn2+，用Mn2+代替Mg2+。非过渡金属Tl+作为K+的NMR探针。 使用探针离子遵循的原则：同晶置换，即探针离子在酶分子中占据原有金属离子所在的同一位置。 电子构型、离子半径、配位几何构型。 很关键问题：是否能继续保持酶分子的生物活性。 金属配位键的强弱对于决定反应的途径也很重要，而这种配位键的强度可随金属不同而变化。 Zn2+的电子结构：d10，在可见区没有吸收。在羧肽酶研究中采用Mn2+，Fe2+，Co2+，Ni2+，Cu2+，Rh3+，Cd2+，Pd2+等离子取代。 Co2+取代的羧肽酶A对肽键的水解具有很强的活性。 Co2+羧肽酶A的吸收光谱与经典的四面体配位的钴配合物很不同，而且摩尔消光系数很大，这是由于金属处在畸变四面体配位引起的；圆二色谱、磁圆二色谱和低温EPR谱的结果证实这一点。 证明锌酶中的Zn2+处于畸变四面体配位状态。 碳酸酐酶研究中，钴酶活性是锌酶活性的50%，而Ni2+，Mn2+，Fe2+酶仅稍具活性，其它惰性。 Co2+取代酶大都能在不同程度上保持酶的催化活性。 电子结构、离子半径、配位几何构型。 Co2+配合物有多种几何构型，高自旋Co(II)配合物优先采取四面体结构。 四面体场中，高自旋Co2+的电子组态为e4t23，相当于Zn2+的d10组态的球对称结构。 采用Co2+作为探针，就能提供锌酶的金属结合部位结构的有用信息。 第二节 羧肽酶 羧肽酶是催化肽链的C-末端氨基酸残基水解的酶。 第一个被发现的锌酶 第一个被发现的金属酶 动力学、结构、光谱最清楚的水解酶 羧肽酶分类： 金属酶，存在于胰液中，细胞外酶，帮助蛋白质消化，中性或弱碱性显示极大的活性 非金属酶（酵母羧肽酶C），细胞内酶，在酸性条件下具有很大活性。 一、羧肽酶A 1.组成、结构与功能 （1）组成：存在哺乳动物胰脏中，相对分子质量34600， Zn2+作为辅基，单一多肽链，约300个氨基酸残基。 研究比较多的是牛的羧肽酶A。 羧肽酶原A在胰蛋白酶作用下，一个肽键断裂，释放出大约60个氨基酸残基的N-末端裂解物。在不同条件下，可以产生4种不同羧肽酶A：α307; β305; γ300;δ300 (2)结构：椭球形，羧肽酶A(α) 大约一半的氨基酸形成α-螺旋结构或β-折叠结构。 其余氨基酸无确定模式，相对容易变形，与底物结合相联系的构象变化主要在这些容易变形的部分发生。 酶分子中部一狭长的空腔，底物结合位置