三维设计2013届年高考生物二轮复习第一部分 专题七 第1讲 基因工程和细胞工程.pptVIP

基 因 工 程 [典例]　　(2012·江苏高考)图1表示含有目的基因D的DNA 片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有 Msp Ⅰ、 BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ 4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。 请回答下列问题。 (1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由____________连接。 (2)若用限制酶 SmaⅠ 完全切割图1中DNA 片段，产生的末端是________末端，其产物长度为____________。 (3)若图1中虚线方框内的碱基对被T－A 碱基对替换，那么基因D 就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA 片段，用限制酶SmaⅠ 完全切割，产物中共有________种不同长度的DNA片段。 (4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是________________________。 [解析]　(1)通过分析DNA 分子结构的特点可知，在DNA 的一条链中，相邻两个碱基依次由脱氧核糖—磷酸—脱氧核糖连接。(2)限制酶 SmaⅠ 的识别序列和酶切位点为CCC↓GGG，酶切位点位于识别序列的中轴线上，所以酶切后形成的末端是平末端。在图1 DNA 片段中，有两个 SmaⅠ的识别序列，完全切割后形成的产物长度有三种，分别为：534＋3＝537 bp; 796－3－3＝790 bp; 658＋3＝661 bp。(3)D基因突变为d基因后，其碱基序列中只含有一个SmaⅠ的识别序列，此时用SmaⅠ完全切割该 DNA 片段后产物的长度有两种，分别为：534＋796－3＝1 327 bp; 658 ＋3＝661 bp。所以，从杂合子(Dd)中分离出的D、d基因 DNA 片段被 SmaⅠ完全切割，产物中有537 bp、790 bp、661 bp、1 327 bp4种不同长度的DNA片段。(4)分析图1 DNA 片段上的限制酶酶切位点可知，BamHⅠ和MboⅠ都可将目的基因从DNA 片段中切下来，但MboⅠ在切割质粒时，抗生素A和抗生素B基因都会被破坏，因此只能选择用BamH Ⅰ 对目的基因和质粒进行处理。质粒用BamHⅠ 处理后，会破坏抗生素A抗性基因，但抗生素B抗性基因正常，所以筛选含重组质粒的大肠杆菌时，一般需用添加抗生素B的培养基进行培养。因为用同种限制酶处理后目的基 因和质粒上形成的黏性末端完全相同，所以部分目的基因D可能会反向连接在质粒上，此类重组质粒上的目的基因D将不能正确表达。 [答案]　(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 (2)平　537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamH Ⅰ　抗生素B　同种限制酶切割形成的末端相 同，部分目的基因D与质粒反向连接 高考 印证 2012年：浙江卷T6，江苏卷T13，新课标卷T40，江苏卷T32，福建卷T32，海南卷T8； 2011年：浙江卷T6，四川卷T5，山东卷T35，海南卷T31； 2010年：全国卷ⅡT5，浙江卷T2，天津卷T7Ⅰ，江苏卷T27 命题 角度 (1)基因工程的操作工具，如例题 (2)基因工程的操作过程，如针对训练 [高考定位] (2012·浙江高考)天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是 (　　) A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA, 经逆转录获得互补的DNA, 再扩 增基因B B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取 基因B C．利用DNA 聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞 D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞 解析：获取目的基因B，可先提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA, 再经PCR技术扩增；基因文库构建时是将目的基因与载体连接起来，形成重组载体，再导入受体菌中储存和扩增，提取目的基因时不需使用限制酶；连接目的基因与质粒的酶是DNA 连接酶；将目的基因导入植物细胞，常用农杆菌转化法，不使用大肠杆菌。 答案：A 1．区分一个至多个限制酶切点与每种酶一个切点 (1)一个至多个限制酶切点：作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，以