解放军307医院EGFR突变检测经验分享课件.pptVIP

EGFR基因的基本情况 EGFR的胞内信号传导途径 EGFR与肿瘤的生长及酪氨酸激酶抑制剂（TKI） EGFR的突变与TKI类药物疗效 EGFR的突变类型 肺癌靶向治疗的里程碑：IPASS研究 肺癌靶向治疗的里程碑：IPASS研究 肺癌靶向治疗的里程碑：IPASS研究 EGFR突变状态指导TKI类药物的使用 目前较为常见的RGFR突变检测方法 EGFR突变检测中需要明确的几个基本概念 EGFR突变检测中需要明确的几个基本概念 1、TapMan 探针法：边扩增边检测 2、高分辨率溶解曲线（HRM）：扩增后再检测 3、变性高效液相色谱分析（dHPLC）：扩增后再检测 4、直接测序法：扩增后再检测 5、焦磷酸测序：扩增后再检测 6、突变富集PCR：扩增后再检测（抑制正常DNA扩增） 7、扩增阻滞突变系统（蝎形探针）：边扩增边检测 各种突变检测方法的综合比较 我们最初采用的方法：直接测序法 注意事项：DNA抽提部分 注意事项：PCR扩增部分⑴ 注意事项：PCR扩增部分⑵ 注意事项：结果分析部分⑴ 注意事项：结果分析部分⑵ 转化医学 测序法敏感性不足将导致假阴性结果 阿斯利康第四期EGFR突变检测培训班 转化医学：以患者为中心，建立临床治疗和基础研究间的双向通道，从临床工作中发现和提出问题，寻找或建立相应的解决方案，然后将其应用于临床，解决临床的实际问题 F Hirsch, et al. JCO 2006 C Zhu, et al. JCO 2008 T Mok, et al. Discovery Med 2009 ISEL Biomarker1 测序法阴性样本 ～200份 ARMS法重新检测 17(+) 测序法复测 7(+) BR21 后续分析2 测序法阴性样本 n=148 ARMS法重新检测 11(+) ARMS法是灵敏度更高的方法，测序法的假阴性率约为8%3 ADx-ARMS：边扩增边检测且保证突变序列的有效扩增 ARMS引物 第一轮扩增 64℃退火 保证特异性 第二轮扩增 60℃退火 保证扩增效率 扩增特异性 由一轮引物保证 突变荧光信号：FAM 内控荧光信号：HEX或VIC 外控荧光信号：FAM 阳性对照：内含阳性质粒 阴性对照：蒸馏水 内外控均检测EGFR基因2号外显子 体系中含特殊石蜡避免气溶胶污染 ADx-ARMS试剂盒的判读流程 是否污染 实验体系 DNA质量 DNA含量 结果判读 参数设置 ADx-AMRS和Dxs ARMS试剂盒的比较 ——阿斯利康中国创新研究中心与张绪超/吴一龙教授等合作共同完成 测序法和ARMS法的比较 我院已采用ARMS进行检测，提供测序法和ARMS两种方法供临床选择 转化研究的理想模式：临床、实验室及企业间密切协作 肺癌个体化诊断与治疗学术交流（2010年12月28日 307医院) ARMS法检测EGFR突变已在我院临床正式开展，其他转化性研究相继展开 ARMS法的检测报告 报告力求简洁明了，不仅有检测结论还要有可靠的事实依据 焕然一新的实验室 307-青藤转化医学中心 1300m2 肿瘤分子诊断 干细胞再生医学 2010年6月动工，现已竣工并投入使用，仪器设备陆续到位 为转化性研究的开展提供了有力的支持 谢谢！ 欢迎大家到307医院来参观交流！ * 解放军307医院EGFR突变检测经验分享 刘 毅 解放军307医院 全军肿瘤中心 肿瘤学研究室 肺癌分子诊断中心 开展EGFR突变检测面临的问题 一、是什么和为什么 二、怎么做及注意事项 三、临床问题的解决：转化性研究 一、是什么和为什么 EGFR：表皮生长因子受体 ——/ 19外显子：5‘-TATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAG-3’ 21外显子：5‘-GGGCTGGCCAAACTG-3’ ——N Engl J Med 2004;350:2129-39 ——Nature Reviews Cancer 2007;7:169-181 ——N Engl J Med 2009;361:947-57 EGFR突变状态已成为患者能否在一线使用TKI药物的重要指标 二、怎么做及注意事项 —— 2、基因突变是指DNA发生碱基序列的改变：须选择有针对性的检测手段，针对非DNA的检测手段如：RT-PCR（检测RNA表达），免疫组化（检测蛋白表达）以及针对非碱基序列的检测手段如：FISH（检测DNA的扩增、缺失、断裂、融合）等，均不适用。 体细胞突变 发生在非种系组织中 不具有遗传性 不会遗传给子代 种系突变 发生于精子或卵子中 可以遗传子代 子代所有细胞均带突变 1、EGFR突变为体细胞突变：发生于肿瘤细胞中，正常细胞（癌旁或白细胞等）不含突变。要尽可能取到足量的肿