第七章酶工程制药讲义.pptVIP

* ⒉连续流动搅拌罐反应器 连续进料、连续出料 连续搅拌釜式反应器（CSTR）。向反应器投入固定化酶和底物溶液，不断搅拌，反应达到平衡之后，再以恒定的流速连续流入底物溶液，同时，以相同流速输出反应液（含产物）。 底物溶液进口 反应液出口 * 优点：混合良好，各部分组成相同，并与输出成分一致； 缺点：搅拌浆剪切力大，易打碎磨损固定化酶颗粒。 * 3. 鼓泡式反应器 鼓泡式反应器(bubble column reactor, BCR) 用于游离酶和固定化酶的催化反应。在使用鼓泡式反应器进行固定化酶的催化反应时，反应系统中存在固、液、气三相，又称为三相流化床式反应器； 鼓泡式反应器的结构简单，操作容易, 剪切力小，物质与热量的传递效率高，是有气体参与的酶催化反应中常用的一种反应器。例如氧化酶催化反应需要供给氧气，羧化酶的催化反应需要供给二氧化碳等。 * (三）沉淀分离 沉淀分离方法 分离原理 盐析沉淀法 不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同，在酶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀 等电点沉淀法 两性电解质在等电点时溶解度最低，不同的两性电解质有不同的等电点，通过调节溶液的pH值，使酶或杂质沉淀析出 有机溶剂沉淀法 酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出 复合沉淀法 在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来 选择性变性沉淀法 选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀，而不影响所需的酶 * 三、酶的纯化 过滤与膜分离 电泳 离子交换层析 * 第三节 酶和细胞的固定化 （一）固定化酶的制备 1、固定化酶（immobilized enzyme）的定义:指限制或固定于特定空间位置的酶。具体讲是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。制备固定化酶的过程称为酶的固定化。固定化所采用的酶，可以是纯化的酶，也可以是结合在菌体（死细胞）或细胞碎片上的酶或酶系。 * 2、固定化酶的特点 （1）可以多次使用，酶的稳定性提高； （2）反应后，酶与底物和产物易于分开，产物中无残留酶，易于纯化。 （3）反应条件易于控制，可实现转化反应的连续化和自动控制； （4）酶的利用率高，单位酶催化的底物量增加，用酶量少； （5）比水溶性酶更适合于多酶反应。 * * （1）载体结合法：将酶结合于不溶性载体上的固定化方法。 A.物理吸附法：用物理方法将酶吸附于不溶性载体上的固定化方法。活性碳,多孔玻璃,树脂等。 优点：操作简单，可选用不同电荷和不同形状的载体，有可能固定化和纯化过程同时实现，酶失活后载体仍可再生。 缺点：最适吸附酶量无规律可循，吸附量与酶活力不一定呈平行关系，酶与载体结合力不强，酶易于脱落，导致酶活下降并污染产物。 * B、离子结合法：酶通过离子键结合于具有离子交换基的水不溶性载体上。DEAE纤维素等 优点：操作简单，处理条件温和，酶的高级结构和活性中心的氨基酸残基不易被破坏。 缺点：载体和酶的结合力弱，易受缓冲液种类或pH的影响，离子强度高时，酶易脱落。 * C、共价结合法：酶以共价键结合于载体上。即将酶分子上非活性部位功能团与载体表面反应基团进行共价结合的方法。 优点：酶与载体结合牢固，稳定性好，不易脱落。 缺点：载体要活化，反应条件苛刻，操作复杂，反应条件剧烈，酶易失活和产生空间位阻效应。 * （2）交联法：用双功能或多功能试剂使酶与酶或细胞与细胞之间交联的方法。交联法又分：交联酶法、酶与辅助蛋白交联法、吸附交联法和载体交联法。常用的交联剂：戊二醛、双重氮联苯胺-2、2-二磺酸、1,5-二氟-2,4-二硝基苯。 * 酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价偶联 酶分子；（a）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交联成水不溶性的固定化酶；（b）酶分子被偶联到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶 * （3）包埋法： A、网格型：将酶或细胞包埋在高分子凝胶细微网格中。 常用合成高分子化合物有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、光敏树脂。天然高分子化合物有淀粉、明胶、胶原、海藻胶、角叉菜胶。多用于固定化细胞。 * B、微囊型：将酶或细胞包埋在高分子半透膜中。通常为直径几微米到几百微米的球状体。颗粒比网格型要小得多，比较有利于底物与产物的扩散，但反应条件要求高，制备成本也高。 * * （二）新型的酶固定化方法 温和的条件下进行，减少酶活力损失，提高固定化效率； 光偶联法：光敏性单体聚合物包埋固定化酶或带光敏性基团的载体共价固定化酶； 等离子体法：高度激发的原子、分子，自由基的聚集体，载体表面用等离子体修饰，引入活性基团。 * 无载体固定化酶直接用交联剂交联 用交联剂交联溶解酶、晶体酶、物理聚集酶、和