改善睡眠功能人體试食验证方案.doc

附件3： 改善睡眠功能评价方法（征求意见稿） 保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 1.1.1体重 1.1.2延长无巴比妥钠睡眠时间实验 1.1.3戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠实验 1.1.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验 1.2 人体试食试验项目：睡眠状况自评量表（SRSS）总分值 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列的指标均为必做项目。 2.2需观察受试样品对动物直接睡眠的作用 2.3在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验：延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验三项实验中任二项阳性，且无明显直接睡眠作用，可判定该受试样品改善睡眠功能动物实验结果阳性。 3.2 人体试食试验：试食组试食后SRSS总分值比试食前有降低，而且与安慰剂对照组比也有降低；或者试食样品前后自身SRSS总分差值比对照组的差值大, 可判定该受试样品具有改善睡眠功能的作用。  改善睡眠功能检验方法 Method for the Assessment of Sleep Improvement Function 1、动物实验 1.1. 实验动物: 推荐用成年小鼠，单一性别，18-22g，每组10-15只。 1.2. 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.3. 实验方法 1.3.1 直接睡眠实验 1.3.1.1 操作步骤：观察受试组动物给予3个剂量的受试样品，对照组给予同体积溶剂后，是否出现睡眠现象。睡眠以翻正反射消失为指标。当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位。如超过30-60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间，记录空白对照组与受试样品组入睡动物数及睡眠时间。 1.3.1.2 数据处理及结果判定 睡眠时间为计量资料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，应改用秩和检验进行统计。 入睡动物数为计数资料，用X2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。 比较对照组与实验组入睡动物数及睡眠时间之间的差异，若入睡动物数或睡眠时间增加有显著性，则实验结果阳性。 1.3.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验 1.3.2.1 原理 在戊巴比妥钠催眠的基础上，观察受试物是否能延长睡眠时间，若睡眠时间延长，则说明受试物与戊巴比妥钠有协同作用。 1.3.2.2 试剂 戊巴比妥钠，用前新鲜配制 1.3.2.3 操作步骤 做正式实验前先进行预试验，确定使动物100%入睡，但又不使睡眠时间过长的戊巴比妥钠剂量（30-60mg/kg），用此剂量正式实验。 动物末次给予溶剂及不同浓度受试样品后，出现峰作用前10-15分钟，给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为0.2ml/20g.BW，以翻正反射消失为指标，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。 1.3.2.4 数据处理及结果判定 一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，应改用秩和检验进行统计。 比较实验组与对照组睡眠时间延长之间的差异，睡眠时间延长有显著性，则实验结果阳性。 1.3.3 戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠实验 1.3.3.1 原理 观察受试物与戊巴比妥钠（或巴比妥钠）的协同作用。由于戊巴比妥钠通过肝酶代谢，而对该酶有抑制作用的药物，也能延长戊巴比妥钠睡眠时间，所以为排除这种影响，应进行阈下剂量实验。 1.3.3.2 试剂 戊巴比妥钠（或巴比妥钠），用前新鲜配制 3.3.3 操作步骤 正式实验前先进行预实验，确定戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下催眠剂量（戊巴比妥钠16-30mg/kg.bw或巴比妥钠100-150