SSR法对棉花早熟性状的标记.docVIP

SSR法对棉花早熟性状的标记 一：早熟性状研究的必要性 棉花是世界上最重要的纤维作物(Kassianenko 2003)。我国棉花常年种植面积在8000万亩左右，新疆棉花种植面积在2000多万亩，是我国最大的商品棉产区。棉花作为我国重要的经济作物，不仅在军事、医疗领域有广泛的用途，还是纺织、印染、服装等行业的原料来源，在国民经济中具有举足轻重的战略地位。因此，棉花育种工作意义重大。新疆棉区以其独有的绿洲灌溉条件和充足的光照资源，近年来成为我国重要的棉产区。但是位于天山山脉北坡的北疆棉区，成长季节短，热量条件相对不足，影响棉花生长的后期的纤维发育，因此早熟性就显得尤为重要。由于棉花早熟性与产量，纤维品质，抗逆性的关系十分密切，早熟品种可以避开后期的低温环境，提高产量和纤维品质。因 此，进一步提高北疆棉区的棉花产量和品质，就需要选育适合北疆生长环境的早熟棉花品种。 早熟性是一个数量性状，相对于质量性状，主要受微效多基因和环境条的影响。用传统的育种方法育成周期长，而且效果不明显。传统育种中，通常是对表现型而非对基因型直接选择，这是因为人们无法直接知道个体的基因型，只能从表现型加以推断，即传统育种是通过表现型间接对基因型进行选择的。这种选择方法一般来说对质量性状是有效的，但对数量性状来说，则效率不高，因为数量性状的表现型与基因型之间缺乏明确的对应关系。即使是质量性状，有的也可能会因为表型测量难度较大或误差较大而造成表型选择的偏差。另外，许多重要的农艺性状如生育期、产量和品质多是受微效多基因控制的数量性状，且必须到发育后期或成熟时才得以表现，因而选择也只能在后期 才能进行。这对于那些植株高大、占地多、生长周期长的作物，显然是非常不利的。总之，传统的基于表型的选择方法存在许多缺点，效率较低。要提高选择的效率，最理想的方法应是能够直接对基因型进行选择。 分子标记为实现对基因型的直接选择提供了可能，因为分子标记的基因型是可以识别的。如果目标基因与某个分子标记紧密连锁，那么通过对分子标记基因型的检测，就能获知目标基因的基因型。因此，我们能够借助分子标记对目标性状的基因型进行选择，这是分子标记在育种中应用的最主要方面。 摘取两个亲本及每一个群体单株未展平的幼嫩叶片，在．70C冰箱保存。DNA提取采用电钻磨样的CTAB法，具体步骤如下： l、取未展平的棉花主茎或果枝叶片I-2片，直接放入1．5ml离心管。 2、加6001．tL预冷的DNA提取缓冲液加入上述离心管。 3、用6mm或更小的匀枪电钻，配以与离心管尖端相吻合的玻璃管或不锈钢钻头(6～8mm)，将棉花研磨至糊状，然后保存在4℃以下环境中。 4、将上述液态样品在4--12℃，10000---12000rpm条件下离心10--1 5分钟。 5、弃上清，沉淀中加入600pL65。C预热的裂解缓冲液，涡旋混匀或用干净牙签将沉淀 混匀。 6、65℃左右温浴15--30分钟(可长几小时)。 7、加等体积(6501aL)的氯仿：异戊醇(24：1)后，来回颠倒50次以上。 8、4～12℃或常温下，12000-15000rpm离心10-15分钟。 9、小心吸取上清液转入一新的离心管中(注意剪枪头)。 10、加2／3体积预冷的异丙醇，来回颠倒至析出絮状DNA沉淀。 11、4-12℃或常温下，1200015000rpm离心10．-15分钟，底部可见白色DNA小团。 12、弃上清，离心管在室温下倒置15--20分钟，风干DNA，此时的DNA小团边缘可见晶体状透明物。 13、加600IxLTE缓冲液溶解DNA小团(可65℃水浴25分钟)。 14、重复7--一9步1～2次，至上清与氯仿之间的杂质几乎不见。 15、上清转入新的离心管，加入1／10体积的3M醋酸钠(PH5．2)后加等体积的异丙醇! 来回缓慢颠倒至析出白色絮状沉淀。 16、4～12℃或常温下，12000---15000rpm离心10---,15分钟，，离心管底部可见白色DNA 小团。 17、弃上清，加600-1000}lL70％7,醇洗5-10分钟。 18、500-100pL灭菌TE溶解。 DNA溶解后，用核酸测定仪测量亲本和群体DNA的浓度。计算稀释倍数，一部分稀释到20ng／laL作为工作液，另一部分作为原液保存在．40C冰柜。