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超氧化物歧化酶(SOD) 活性测定 * * (NBT法) 一、测定意义 二、目的要求 三、原理 四、仪器设备 五、试剂配制 六、植物材料 七、操作步骤 八、结果计算 九、注意事项 十、思考题 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一、意义： 细胞内自由基的产生和消除处于动态平衡状态，自由基水平很低，不会伤害细胞。 植物正常情况下 植物逆境胁迫下 O-.2、H2O2、OH·的产量增加； SOD、CAT、POD活性降低； VtE、VtC、CAR、GSH含量降低； 从而伤害细胞。 植物体内活性氧代谢系统的平衡被打破 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 什么叫逆境？ 逆境是指对植物生存生长不利的各种环境因素的总称. 逆境的种类? Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 为什么要测定完全液和缺素苗的SOD活性？ Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、目的要求： 1.了解SOD活力测定的实践意义； 2.掌握SOD测定的原理及操作要点； 3.比较完全液溶液和缺素溶液培养的 玉米苗叶片SOD活性的差异。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 三、原理： Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 三、原理： 依据SOD能抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2.-，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2.-，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 四、仪器设备 研钵；玻璃试管; 40W荧光灯; 移液管等。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 五、试剂配制 ? 1、提取介质─50mmol/L(pH7.0)磷酸缓冲液。 2、反应介质─50mmol/L(pH7.8)磷酸缓冲液, 内含77.12μmol/L硝基四唑蓝, 0.1mmol/L EDTA, 13.37mmol/L蛋氨酸。 3、80.2μmol/L核黄素溶液: 用含有0.1mmol/L EDTA的50mmol/L(pH7.8)的磷酸缓冲液配制。 SOD反应混合液 3.9ml反应介质 0.1ml 80.2μmol/L核黄素溶液 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 六、植物材料: 玉米叶片: 完全液培养苗 缺素液培养苗 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5
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