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第三章 生物物证常见技术 第一节 电泳技术 第二节 层析法 第三节 比色分析技术 第四节 离心技术 第五节 显微镜技术 第一节 电泳技术 电泳是指在电场中的带电粒子向电性相反方向发生位移的现象。是蛋白质、核酸分析鉴定的主要技术之一。 电泳原理 在同一电泳条件下，不同带电颗粒因其分子大小和带电量的不同具有不同的泳动速度。因此电泳一定时间，就能相互分开。 电泳的分类 自由界面电泳 ：电泳可以直接将样品放在缓冲液中进行 。 区 带 电 泳 ：将样品放在固体支持物上进行电泳，因待测样品各组分的泳动率不同被分离成不同的区带 。 区带电泳分类 （一）据电场强度分：高压；常压；低压。 （二）据支持物种类分：滤纸；醋酸纤维薄膜；琼脂糖凝胶；聚丙烯酰胺凝胶。 （三）据支持物形状分：水平板；垂直板；柱状；圆盘；U 形管；毛细管。 （四）据原理分 ：等速；免疫；等电聚焦。 （五）据方向分 ：单向；双向。 （六）据目的分：分析；制备。 （七）据缓冲液 pH 分 ：连续 pH ；非连续 pH。 电泳步骤 电泳的一般操作程序包括支持物的准备、加样、电泳、固定、染色、脱色、定性观察及定量测定等过程。 1、高压电极槽与进样机构? 2、填灌清洗机构? 3、毛细管? 4、检测器?? 5、铂丝电极?? 6、低压电极槽?? 7、恒温机构??? 8、记录/数据处理 第二节 层析法 所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量比）不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。 层析操作 第三节 比色技术 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 比色技术分类 光谱分析技术可分为发射光谱、吸收光谱和散射光谱三大类。基于发射光谱分析的方法有火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法，基于吸收光谱分析的方法有紫外 - 可见光分光光度法，原子吸收分光光度法和红外光谱法；基于散射光谱分析的方法有比浊法。  A=abc 式中A为吸光度，b为溶液层厚度（cm），c为溶液的浓度（g/dm3)， a为吸光系数。 当固定溶液层厚度l和吸光系数a时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系。 比色仪器 紫外分光光度计，可见分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。 722 第四节 离心技术 离心技术是实验室常采用的技术，主要是利用离心力将悬浮液中的悬浮微粒快速沉降，借以分离比重不同的各种物质成分的方法。 F?＝重力－浮力 ＝?VPg?－?Vδg?＝?Vg?（?p?－?δ?） 　式中: ?F?—— 下沉力； 　V?—— 微粒体积； 　P?—— 微粒密度； 　δ?—— 介质密度； 　g?—— 重力加速度。 　　当?P?＞?δ?时，微粒下沉；?P?与?δ?差值越大，微粒下沉速度越快。因此，加大离心机转速可加快离心微粒的沉降速度 离心机分类 （一）根据转速 分类 1 、常速离心机：转速少于 5000r/min ，用于一般液体可沉淀颗粒的分离，或制备一般的组织匀浆。 2 、高速离心机：转速 5000 - 25000r/min ，用于细胞器的分离和生物大分子的制备。 3 、超速离心机：转速超过 25000-85000r/min ，多用于亚细胞结构的分离和生物大分子的制备。 　 （二）根据温度 分类 1 、常温离心机：室温（ 25 ℃ ）下工作。常速离心时使用。 2 、低温离心机：在 4 ℃ 下工作。高速离心时使用。 3 、冷冻离心机：在 0 ～－ 25 ℃ 工作。超速离心时使用。　 （三）根据体积大小和放置方式分类 1 、台式离心机：体积小，放在操作台上，用于微量物质的提取。 2 、落地式离心机：体积大，放在地面上，用于大量物质的提取。 （四）根据供能方式 分类 1 、自动式离心机：设置程序后，电脑程序控制离心速度和时间。 2 、电动式离心机：由操作者接通电源、利用旋钮控制离心速度和时间的离心机。 3 、手动式离心机： 第五节 显微镜技术 一、发明 最早的显微镜是16世纪末期在荷兰制造出来的。发明者可能是札恰里亚斯·詹森（眼镜商）或汉斯·利珀希（科学家），他们用两片透镜制作了简易的显微镜，但并没有用于观察。 第一个使用者是伽利略。第二个是荷兰商人安东尼·凡·列文虎克。 1931年，恩斯特·鲁斯卡研制了电子显微镜，1986年他被授予诺贝尔奖。 二、分类 （一）光学