生物科学细胞生物学实验课探讨.ppt

实验六 人染色体分带技术 — G带 实验目的 实验原理 试剂与器材 操作方法 注意事项 作业与思考 一 实验目的 掌握制备G带染色体方法。 了解G带染色体在细胞遗传学分析中的重要意义。 二 实验原理 染色体显带技术 将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带文，这些横行带纹为染色体带。 如果染色体上某一区域的DNA为重复序列，转录活性低，相应地包装它们的蛋白质也较稳定，可能通过较强的二硫键形成很稳定的疏水的a-螺旋结构，成为染料沉淀物积累的环境，从而显示出阳带(暗带)。反之，如果染色体上某一区域的DNA富含具转录活性的结构基因，则功能上相对活跃，包装它们的蛋白质也较疏松，构象上类似b-折叠结构，经处理后二硫键断裂，还原为巯基，成为亲水性蛋白，不利于染料沉淀物的积累，所以着色浅，显示阴带(明带)。 Giemsa染料是噻嗪-曙红燃料，着色之一取决于染色体原位形成噻嗪-曙红沉积物，两个噻嗪分子和DNA结合，在此基础之上再结合1个曙红分子；其次取决于一个疏水环境，以利于燃料沉淀而着色。G带显带在用Gimsa染色以前，要用胰蛋白酶进行预处理，将染色体阴性G带区的疏水蛋白除去或使它们的构型变为更为亲水状态，以利于着色。 G带区含有较丰富的A-T对，在间期核呈固缩状态，是DNA晚复制区之一。Giemsa燃料在G带区与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。其特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。 二 实验原理 三 试剂与器材 材料 人染色体标本。 试剂 GKN液、胰蛋白酶液、Gimsa染液、香柏油等。 器材 恒温培养箱、恒温水浴箱、显微镜、染色缸、量筒、烧杯等。 四 实验内容 置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3-7天进行显带。 将染色体标本投入胰酶液中，以15s、30s、1min、1.5min、2min不同时间进行预试片，选择最佳时间。（随着片龄的增长、时间也随之增长）。 在GKN液内漂洗30s。 Gimsa染液中染色8-10min，流水冲洗。 镜检。质量较好的染色体标本可用二甲苯透明，D.P.X(中性树脂)封片。 男性G显带(10××100×) 女性G显带(10××100×) 人类23对染色体的G显带记忆口诀 一秃二蛇三蝶飘， 四像鞭炮五黑腰； 六号像个小白脸， 七盖八下九苗条； 十号长臂近带好， 十一低来十二高； 十三、四、五、四二一； 十六长臂缢痕大； 十七长臂带脚镣， 十八白头肚子饱； 十九中间一点腰， 二十头重脚飘飘； 二十一好像黑葫芦瓢， 二十二头上一点黑； X染色一担挑， Y染色长臂带黑脚。 五 注意事项 胰蛋白酶处理时间不宜过长。 观察染色体标本时，应先用低倍镜再用高倍镜、油镜观察染色体长轴上明暗和宽度不同的横纹即带。 油镜观察后应立即将镜头清理干净。 六 作 业与思考 正常人染色体核型分析。 正常人染色体的数目及结构特点。 染色体核型分析在临床疾病诊断中的作用。 End，ThankS！ A组：1-3号染色体。 1号染色体。 短臂：近侧段有2条深带，第2深带稍宽，在处理较好的标本上，远侧段可显出3～4条淡染的深带。此臂分为3个区，近侧的第1深带为lp 21；第2深带为1p31。 长臂：副缢痕紧贴着丝粒，染色浓。其远侧为一宽的浅带，近中段与远侧段各有两条深带，此中段第2深带染色较浓，中段两条深带稍靠近，此臂 分为4个区，副缢痕远侧的浅带为lp21号带、中段第2深带为lp31号带，远侧段第1深带为lp41号带。 2号染色体。 短臂：可见4条深带，中段的2条深带稍靠近，此臂分为2个区，中段两条深带之间的浅带为2p21。 长臂：可见7条深带，第3和第4深带有时融合。此臂分为3个区，第2和第3深带之间的浅带为2p21带，第4和第5深带之间的浅带为2p31号带。 3号染色体。在长臂与短臂的近中段各具有1条明显的宽的浅带。 短臂：一般在近侧段可见1条较宽的深带，远侧段可见2条深带，其中远侧1条较窄，且着色淡，这是区别3号染色体短臂的显著特征。在处理较好的标本上，近侧段的深带可分为2条深带，此臂分2个区，中段浅带为2区1带。 长臂：一般在近侧段和远侧段各有1条较宽的深带，在处理好的标本上，近侧段的深带可分为2条深带，远侧段的深带可分为3条深带，此臂分为2个区，中段浅带为2区1带。该染色体的G带图有点象蝴蝶结。 B组：4-5号染色体。 4号染色体 短臂：可见2条深带，近侧深带染色较浅，短臂只有1个区。 长臂：可见均匀分布的4条深带，在处理较好的标本上，远侧段的2条深带可各自分为2条较宽的深带。此臂分为3区，近侧段第1和第2深带之间的浅带为