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栽培种花生EST―SSR引物的开发及应用 　　摘 要：由于对农作物的要求不断提高，栽培种花生在产量和应用开发上实现了有效的实施。河南省内乡县农业技术推广中心在本文中利用相关材料，通过对EST-SSR引物和应用效果进行分析，从而实现了最佳的引物效果，实现了野生种子的有效性和扩展效果。 　　关键词：花生；EST-SSR；开发及应用 　　中图分类号：S565.2 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160333102 　　花生作为一种豆类食品，在栽培过程中，它属于野生种子。这种野生性的花生能抵抗一些病虫害，还能形成高质量的油类。所以，为了保证花生在栽培期间形成良好的资源基础，就要利用SSR引物来实现完善性的开发和利用。 　　1 EST-SSR的概述 　　EST-SSR是一种新型的分子标记方式，在种植的多种作物上都能建立良好的标记效果，也能对物种进行有效的遗传分析。由于EST数据的不断增长，SSR成为主要的引物来源，所以EST-SSR引物开发成为花生作物主要的研究途径。从EST中体现的EST-SSR引物改变了传统的SSR引物开发形式，对一些基因建构和DNA复杂文库进行了优化，而且在表达基因上也得到间接和直接的联系，在遗传学领域发展中得到有效的利用。EST-SSR具有3种特殊优势：实现的信息量比较大，如果EST在某一处的标志发生连锁效应，EST就会与控制形状的相关基因有联系；通用性也比较好，由于EST是转录区的来源方式，具有较高的保守型，所以在亲缘物种之间具有明显的利用价值；不仅开发的成本比较低，开发形式也比较简单。在花生标记和研发上具有重要作用，不仅对分子标记实现了开发性和稳定性，对花生种子的栽培也具有重要意义[1]。 　　2 研究材料与方法 　　选择花生抗青枯病高油品系列，根据每个叶子和根的EST数量，对栽培品种的EST-SSR进行检测。要提取花生基因组的DNA，利用CTAB-酚方法，还要保证一定的测试浓度和纯度、DNA的质量等。实现EST的序列拼接方式，利用聚类的相关软件，将所有的EST拼接起来，并保证一定的拼接标准。再使用SSR位点进行搜索，在拼接后产生的序列方式上，利用一定的时间，搜索出相关的应用材料。还要对SSR引物进行设计，根据两端的保守区域，利用Primer3软件对引物进行设计，在引物温度的选择上、长度范围都要经过严谨筛选。实现PCR的扩增，根据PCR中每个反应体系，对SSR的正反向建立DNA模板，利用电泳方式在显微镜下进行分析。 　　3 对结果进行分析 　　根据实验的研究表明，栽培花生种子在DNA下的提取可以看出，所有的品种叶子都得到了较高的DNA质量，而且在紫外分光上的检测以及电泳上的检测，所有得到的DNA都比较完整，没有发生讲解现象[2]。在序列拼接期间，为了减少EST序列的冗余，就要对某个特定的基因实现共有序列方式。在EST-SSR中产生的分布频率和特点也不同，花生栽培中的种类比较丰富，在各个材料中，核苷酸出现的频率比较高，二核苷酸出现的重复类型比较多。在已经搜索出的栽培花生种子EST-SSR中，出现的频率也不同。在EST-SSR引物中产生的设计和检测的多态性中，利用Primer3可以看出，由于SSR位点出现的序列比较短、结构比较复杂，不能进行引物的设计。所以利用EST-SSR引物对花生的栽培品种进行PCR扩增，然后根据清晰的条带检测出种子的多样性，从而检测出引物的等位基因。 　　4 对结论进行讨论 　　根据实验和结果的分析可以得到，花生SSR引物在开发期间，主要对基因组SSR引物的开发、引物的开发转移等。利用EST-SSR方法，在花生种子栽培中检测出EST的位点，然后对作物中EST产生的SSR进行表示[3]。在EST-SSR中，大多数的植物都是以三核苷酸和二核苷酸作为主要的重复类型的，由于植物叶子的不同性，花生中的栽培品种以EST-SSR中的三核苷酸作为主要的重复类型。由于叶子中含有丰富的重复类型，所以在四、五、六核苷酸重复类型中不会经常出现。该实验也使用了扩增性，由于扩充区的复杂结构，引物在进行扩增期间，就会出现一些条带的显示，从而为栽培花生中的基因作为重要的引物序为。 　　5 结 论 　　在花生栽培过程中，利用EST-SSR引物进行开发和标记是可行的，不仅实现了野生种子的有效性和扩展效果，对花生中产生的多样性资源也产生重要意义。EST-SSR这种表达基因方式不仅能够对花生的分子类型进行标记，还能在遗传性方面实现多种方式的应用价值。 　　参考文献 　　[1] 江建华，倪皖莉，肖美华.花生SSR标记的开发及其应用现状和前景[J].花生学报，2012（2）：39-45. 　　[2] 唐梅，陈玉宁，任小平等.源于栽培种花生的EST-SSR引物对野生花生