瑞利Rayleigh光散射检测新技术在毛细管电泳中的应用.pdfVIP

瑞利(Rayleigh)光散射检测新技术在毛细管电泳中的应用 齐莉王强 陈义木 (中国科学院化学所100080) 1．引言 当光照射到分散体系时，如果粒子的尺寸大于入射光的波长时，会发生光反射；如果粒 子极小，光会商接从分散体系中透射过去；如果粒子的尺寸小于入射光的波长时，会发生光 散射。 对丁．直径在5一一100纳米之间的微粒来说，它们的瑞利(Rayleigh)光散射强度与粒子 体积的平方成正比。Rayleigh在十九世纪七十年代推导出了如下光散射公式： 2 R0-9儿2C p M(n22一n21／n224-n22)2／2NA入4 式中，n22为粒子的折射率；n21为分散介质的折射率；p为粒子的密度，c为粒子的质量浓 度：M为粒子的分子姑；NA为阿佛加德罗常数。 当瑞利散射的波长位于分子的吸收带时，其散射强度急剧增强，这种现象被称为共振瑞利 散射(Resonance RayleighScattering，RRS)。传统的瑞利散射信号不强，而共振瑞利散射可应 川于溶液中的分子研究。二十世纪九十年代，RRS才被应j=I；i于DNA，蛋白质及某些金属离子的 研究。 本文通过铬(Cr)一碘化物一罗丹明B离二J：缔合物反应体系及锰(Mn)一碘化物一罗丹明 B离子缔合物反应体系，在自制毛细管电泳装置上，应用在线瑞利光散射检测器，对离子缔合 研究，并对其反应机理进行了初步探讨。 2．实验方法 2．1仪器和试剂 自制毛细管电泳装置雨I在线瑞利光散射检测器。 信号记录与数据处理系统：SClloo色谱工作站。 实验用水为三蒸水；试剂均为分析纯。 2．2实验方法 15分钟后刖RRS法测定。 12m la uL。 RRS中的毛细管为500I．D；流速为100L／mira流通池容积为50 lam I．D； 高效毛细管电泳(HPCE)缓冲液为40raM的NH4Ac，pH6．80；石英毛细管为75 负极性高压电源；运行电压为9．OkV；PMT的工作电压为600V；高差虹吸进样，高度10cm， 进样时间20秒。 3．结果与讨论 3．1反应时间 铬(cr)一碘化物～罗丹明B反应体系及锰(Mn)一碘化物一罗丹明B反应体系的光散 射信号强度会随时间的延长而减弱，但在10—60分钟内，其光散射信号强度变化不大，本实验 24 选择体系混合后，放置10一一15分钟后再测定，每次实验不超过l小时。 3．2Kl与罗丹明B浓度 3．3溶液的pH 溶液的酸度影响离子缔合物的形成及其稳定性，也会影响HPCE分离过程中的电流大小及 峰形，并进而影响散射光的强度。为得到平稳的基线及对称的检测峰，最佳的盐酸浓度范围为 0．10一一0．48M；HPCE缓冲液的最佳pH为6．80。 3．4Or与啊n的检测 反应，并形成新的离子缔合物[RhB][13-]。本实验应用自制的在线瑞利光散射检测器，对离子 H u 的HPCE—RRS图谱(见图1，图2)。本实验可以检测到3．5 g／mL g／mL的Cr(VI)和43．5 的Mn(VII)。 3．5离子缔合反应机理 本反应体系中存在着两个反应：氧化一还原反应和离子缔合反应。 (1) 氧化I一而生成13-阴离子； (2) 13-与RhB+形成离子缔合配合物。 同，说明[I。-]一[RhB+]的离予缔合作用中，不仅具有离子问的静电引力，而且还可能发生了电 荷转移。 Q