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植物转基因技术原理及要点 李琳玲 1.目的基因的分离 （1）已知基因的获得 ①化学合成法 ②PCR扩增 （2）未知基因的获得 ①构建基因组文库，筛选目的基因 ②构建cDNA文库，筛选目的基因 ③mRNA差异显示技术筛选差异表达基因 ④差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因 …… 例 pBI121-chs构建 银杏chs基因植物表达载体构建示意图 3.受体材料的准备 细胞的全能性：分化细胞脱分化 再分化 4.遗传转化 （1）间接转化法——农杆菌介导转化法 （2）直接转化法 A、 基因枪转化法 B、 电击法 C、花粉管通道法 D、 PEG介导基因转化法 PEG介导基因转化的主要原理是聚乙二醇(PEG)、多聚-L-鸟核苷酸(pLO)、磷酸钙及高pH值条件下诱导原生质体摄取外源DNA分子.PEG可促使细胞膜与DNA间接触与粘连,并通过引起膜表面电荷的紊乱及干扰细胞间的识别,利于细胞膜间的融合以及外源DNA进入原生质体. 表1 几种植物转基因方法比较 5.转化组织 ——农杆菌介导之叶盘转化法 遗传转化主要的影响因素： 1.预培养时间：一般0~3天，过长不利于侵染 2.农杆菌浓度：用MS（pH=7.0）盐溶液调OD值（一般在 0.2~1.0） 3.侵染时间：时间应适中，太短转化率低；太高则后期