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生物技术在梨树研究中的应用 张丽1 王国英1 张玉星1 贾志国2 (1河北农业大学园艺学院，保定071000；2河北北方学院，张家口075131) 摘要：综述了植物组织培养，转基因和基因克隆、分子标记等生物技术近年来在梨属植物 上的应用。并提出了当前存在的问题和发展前景。 关键词：梨I组织培养；基因；分子标记 梨是原产我国的古老的果树种类之一，已有三千多年的栽培历史，品种约有3000多 个，种质资源非常丰富。近几十年来，梨树育种工作者通过资源调查、引种、实生选种、优 良芽变选种和杂交育种等方法，选育出了一些梨树优良品种，并在各地生产上推广应用，但 是由于梨树是多年生木本植物，育种周期长，遗传上高度杂合，给育种工作带来较大困难， 在一定程度上阻碍了梨树遗传育种研究的深入。现代生物技术的兴起，把对植物的研究从宏 观水平提高到微观水平，以植物组织培养，分子标记，遗传工程为主体的生物技术在梨树上 的应用为梨树遗传育种工作提供了有效的研究方法，尤其是分子标记技术的应用为基因组作 图和最终实现基因的克隆和转化提供了有力的工具。 1组织培养在梨树上的应用 梨的组织培养起步较晚，20世纪80年代，戴洪义等[1]对砂梨的茎尖和腋芽的离体培 96．7％。目前已有康弗伦斯、小香、考密斯、帕西等欧洲梨品种取得了成功。在东方梨 金花梨等[11]品种有了不定梢再生的报道。韩继成等[9]报道了用TDZ诱导冀蜜和丰水梨离 体叶片形成不定芽。韩文璞等[12]以两年生树的春梢为试材，研究了黄金梨的组织培养和 快速繁殖途径。李晓玲等[”]研究了光对苹博1号梨试管苗生长的影响。孙清荣等[14]研究 了7一射线对梨离体叶片不定梢再生及芽生长的影响。曾艳玲[15]等以新高×翠冠等10个 杂交梨组合和新高×新高等3个自交梨组合的未成熟种胚为试材，进行了幼胚组织培养 的研究。 生物技术在梨树研究中的应用 197 2转基因与基因克隆技术的应用 2．1转基因研究 转基因技术是直接从分子水平上进行遗传操作，定向改造植物性状的手段。通过对有益 外源目的基因的导入，可培养出抗病、抗虫及抗逆境的转基因植株，从而培养出抗性新品 种：目前梨的遗传转化普遍采用了农杆菌介导法(Ti质粒法)，它是通过将其体内的一般 DNA(T-DNA)转移至被侵染的植物细胞内而实现的[1 体，用带致瘤质粒的农杆菌(pTiT37)感染转化，诱导出了瘤组织并分化出了不定芽。尽 法成功的将GUS及Npt11基因导人康弗伦斯，并获得高达42．7％的遗传转化率。此后，这 种方法在梨转基因中得到了广泛应用，所获得的稳定转化体频率高，结果重复性好，且操作 简单。目前康弗伦斯、帕西、杜康、BourreBose等西洋梨品种已成功实现转基因并获得了 转基因植株。而东方梨仅有砧木种杜梨(P．betulaefolia II和GUS基 成功[19]，Kaneyoshi等以杜梨的子叶作为受体材料，通过农杆菌介导法将Npt 梨火疫病有抗性作用，将抗菌肽转化西洋梨，获得的转基因植株对火疫病的抗性有了提高。 3家研究单位的5个项目的转 目前美国已有美国农业试验站(ARS)和Exelixis、Agritope 基因梨，在美国农业部(USDA)进行田间风险释放试验，主要的经济性状是抗火疫病和延 缓果实成熟。 2．2基因克隆技术 基因克隆在遗传标记和基因组作图等方面有着重要的应用。许多重要的基因只有在克隆 后才能加深对其基本功能的了解并对其加以修饰，以创造新的表型并实现它在不同品种或物 序列设计引物，利用RT-PCR方法从果皮中克隆出花青素生成相关基因f3h基因的全场 世纪及其亲和突变品种奥嘎二十世纪的花柱中克隆出编码S2和s4糖蛋白的cDNA，它们包 (201～203个残基)组成。 3分子标记技术的应用 分子标记指可遗传并可检测到的DNA序列或蛋白质。蛋白质标记于20世纪50年代兴 起，主要指同工酶、等位酶、贮藏蛋白等等。随着分子生物学的进一步发展，DNA分子标 记逐渐发展起来，它是以直接检测到DNA碱基序列的差异为基础的遗传标记，其结果不受 环境影响，检测出的位点多，信息丰富，鉴别力强。DNA分子标记