甲醛对大鼠血清中SSAO催化的脱氨基氧化反应的影响.pdfVIP

C23甲醛对大鼠血清中SSAO催化的脱氨基 氧化反应的影响 王琳肖盛元杨嘉明邓玉林+ 北京理工大学生命科学与技术学院北京100081 SSAO(sernjcarbazied—sensitiveamine oxidases)是一类对氨基脲敏感的氨基氧化酶的通称， 它能催化胺类物质转换成相应的醛类并产生过氧化氢和氨。现有很多测SSAO活性的方法都 是通过测定产物中醛类物质的生成量来进行的。在以F踟女为底物测血清中SSAO活性的实验 中，生成的大呈甲醛可能会对该反应有一定的反馈抑制作用，同时甲醛也可能与血清中蛋白 质发生交联，这些都会对活性测定结果造成影响。本试验应用HPLC与MS联用的方法，深 入探讨了甲醛对血清中SSAO催化的脱氨基反应的影响，认为甲醛具有对该反应的反馈抑制 作用同时可与蛋白质发生交联，为进一步研究SSAO及其与相关疾病的关系奠定了基础。 1实验部分 1．1试剂和仪器 公司。甲胺，甲醛均为分析纯。主要仪器为Agilent 1100LCMSDTrapMS。 1’2样品处理 健康Wister大鼠尾静脉取血，于2500 rain，取上层血清做为酶样。 g，4C冷冻离心20 1．3方法 mmX250film，5um，10％(V／V)乙腈，缓冲盐的流动 色谱条件：DiscoveryF5．SH柱4．6 uL。 相(pH4．0)，流速0．8ml／min，进样量20 质潜条件：检测器为MS，ESI源，正离子模式，一级质谱做全扫描，扫描范围160～220 m／z，提取m／z L／rain。 170的离子流色谱图。雾化气压力为30psi，干燥气流速为9 1．4SSA0活性的测定 6．8)中，37℃ 标准甲醛溶液中加入40mg多巴胺．在400ul的o．05M磷酸盐缓冲液(pH 1。体外血清 反应30分钟，PCA终止反应。9mg异丙基肾上腺素做为内标，终体积为500p 反应体系为：25ram甲胺、10 rain，取上清液过滤进样。 2实验结果 如图1所示，A为一个典型的色谱分离效果图，SSAO催化的脱氨基氧化反应产物甲醛进 ～步与多巴胺发生衍生化反应，通过优化pH值等液相条件町以使甲醛与多巴胺反应产物 2可知，甲醛浓度为o．05uM时，C大于A，小于A+B：甲醛浓度为50uM时，C小于A。 3讨论 A为甲醛与多巴胺反应的结果，B是甲胺为底物加入血清和多巴胺反应的结果，C是A 与B反应的加和。理论上说，A加B的值应该等于C，但由实验结果可知，甲醛浓度低时，c 小于A加B，这可能是因为生成的产物甲醛又反过来对该反应有着一定的反馈抑制作用。当 甲醛浓度较高时，C反而小于A，这可能是由于大量的甲醛与血清中蛋白质发生交联反应， 而这一反应在甲醛浓度较低时可以忽略不计。由此可知，我们在通过酶反应产物甲醛的量测 137 生物样品中的SSAO活性时．应控制生成的甲醛浓度在一个适当的范围内，使其在各方面对 该反应的影响降到最低，从而得到最可靠的实验结果。 ：画～m m) Formaldehyde Dopamine ：画r“ 上一 ～彳… ：／鳓