維生素类药物的分析.docVIP

维生素类药物的分析 维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类活性物质，具有调节机体代谢过程和用于机体能量转移等功能，体内不能自行合成，须从食物中摄取。从化学结构上看，维生素类均为有机化合物，但并不是同一类物质，而是分别属于醇、酯、酸、胺、酚、醛等，其理化性质和生理作用各异。一般可按其溶解度分为脂溶性和水溶性两大类，脂溶性维生素有维生素A、D、E、K等，水溶性维生素有维生素B1、B2、B6、B12、C、烟酸、泛酸、叶酸等。 根据本类药物的生物特性及理化性质，其分析方法很多，有生物法、微生物法、化学法和物理化学法，其中常用的分析方法主要是化学法和物理化学法。本章仅对五类比较重要的维生素（A、B1、C、D、E）进行讨论，阐述其化学结构、理化性质以及与分析方法的关系，结合《中国药典》重点讲解本类药物的鉴别、杂质检查和含量测定的原理和方法。 维生素A的分析 维生素A（Vitamin A）包括维生素A1（视黄醇，Retinol）、去氢维生素A（Dehydroretinol，维生素A2）和去水维生素A（Anhydroretinol，维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，维生素A2的生物活性是维生素A1的30％～40％，维生素A3的生物活性是维生素Al的0.4%。因此，通常所说的维生素A即指维生素A1。维生素A1是一种不饱和脂肪醇，目前主要采用人工合成方法制取。在自然界中，维生素A主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油（通称为鱼肝油），其含量高达600000国际单位／克（IU／g）。在鱼肝油中，维生素A多以各种酯类混合物的形式存在，其中主要是醋酸酯和棕榈酸酯。 《中国药典》收载的维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，同时还收载维生素A软胶囊、维生素AD软胶囊和维生素AD滴剂。 药物结构与理化性质 药物结构 维生素A的结构（图4?1）为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烯，因而具有许多立体异构体。天然维生素A主要是全反式维生素A。维生素A常以醋酸酯、棕榈酸酯等形式存在，称为酯式维生素A，而图4?1则称为醇式维生素A或维生素A醇。 图4?1 维生素A 去氢维生素A（图4?2a）和去水维生素A（图4?2b）以及无生物活性的维生素A醇的二聚体（鲸醇）也有紫外吸收，并能与显色剂产生相近的颜色，在测定维生素A含量时必须考虑这些因素的干扰。 （a） （b） 图4?2 去氢维生素A（a）和去水维生素A（b） 理化性质 溶解性 维生素A与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚能以任意比例混合，微溶于乙醇，不溶于水。 稳定性 维生素A分子中含有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中的氧或氧化剂氧化，也易被紫外光裂解，尤其是在加热和金属离子存在时更易氧化变质，生成无生物活性的环氧化合物，并能进一步氧化生成维生素A醛或维生素A酸。无空气时，见光会聚合生成二聚体。长期放置，会发生异构化。此外，维生素A对酸也不稳定，遇酸可发生脱水反应或发生异构化。因此，维生素A及其制剂需密封避光保存，并加入合适的抗氧剂。维生素A醋酸酯或棕榈酸酯较维生素A稳定，故一般将酯式维生素A溶于植物油中供临床使用。 紫外吸收特性 维生素A分子中具有共轭多烯醇的侧链结构，在325~328nm波长范围内有最大吸收。 显色反应 维生素A在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。 鉴别试验 维生素A与三氯化锑的显色反应（Carr-Price反应）可用于维生素A的鉴别。氯化锑（Ⅲ）中存在亲电试剂氯化高锑（Ⅴ），维生素A的醇羟基可在其作用下裂解，形成不稳定的蓝色碳正离子。反应方程式如下 测定方法：取维生素A油溶液1滴，加氯仿10ml，振摇，使溶解；取2滴，加氯仿2ml和25%三氯化锑的氯仿溶液0.5ml，立即产生不稳定的蓝色，渐变成紫红色。 由于水可使三氯化锑水解成氯化氧锑(SbOCl)，而乙醇可以和碳正离子作用使其正电荷消失，故反应需在无水、无醇条件下进行。 含量测定 紫外?可见分光光度法 原理与方法 利用维生素A的紫外吸收特性，可测定维生素A的含量。目前，各国药典均收载紫外?可见分光光度法作为维生素A法定的含量测定方法。《中国药典》（2010年版）规定，维生素A原料药和维生素A软胶囊均用本法测定含量。 人工合成的维生素A或不同品种的鱼肝油常含有多种异构体、氧化降解产物、合成中间体、副产物等，维生素A制剂中还含有稀释用油，这些物质在325~328nm波长范围内也有吸收，故采用紫外?可见分光光度法测得的吸光度并不是维生素A独有的吸收。为了消除非维生素A物质的无关吸收所引起的误差，须在规定条件下用校正公式进行校正，以求得准确的结果。 取供试品适量，精密称定，溶于环己烷中，制成每1ml中含9～15IU的溶液，测定最大吸收波长（应为328nm），并在300、