ALK靶点检测讲解.ppt

Ventana IHC试剂盒已于2013.8全部获得CFDA批准，用于检测ALK阳性NSCLC ALK ALK Ventana检测推荐的检测时间 1：节约标本--针对非小细胞肺癌在第二次切片的时候多切2张切片 2：节约费用—用IHC的方法让更多患者得到筛查 3：节约时间—随病理大报告同时得到ALK结果 细胞学标本检测ALK 针对锁骨上淋巴结FNA，和胸水，都可以常规进行Ventana IHC检测 谢谢！ * 传统的病理分型主要依赖显微镜下的组织分型，随着科学技术的进步，这一传统方式已不再完全适用于癌症的诊断，在NSCLC中，组织病理分型演变为分子分型，NCCN指南也指出对于NSCLC患者需要检测基因型别。 * 那么为什么称为精确的分子病理诊断？首先，诊断里面有两大更新，第一大更新是病理报告的内容。在2011版里面，病理报告的内容是不需要提到分子检测结果的，在2015版里面我们规定了，标准的病理报告里面，诊断内容必须包括肿瘤部位、组织学亚型、累积范围等等，其中新增加了分子检测结果。这一条更新在临床实践中进一步规范了诊断，我们都知道标准的非小细胞肺癌诊断，比如说右上叶肺腺癌，T3N2M1，转移部位是骨，IV期，这是以前的标准肺癌诊断，但是由于诊疗规范，病理报告必须要明确分子病理检测结果，以后的标准肺癌诊断里面必须添加基因状态，如ALK阳性或EGFR阳性/阴性。标准诊断必须包含分子基因检测结果，特别是EGFR和ALK。第二个更新是在非小细胞肺癌驱动基因的检测方面，2011版没有推荐常规做EGFR和ALK检测，2015版提出对于晚期非小细胞肺癌、腺癌或者含腺癌成分的其他类型肺癌，应在诊断的同时常规进行EGFR和ALK基因突变的检测，标本需要有质控，标本类型包括活检组织、细胞学标本和细胞蜡快，方法一定要获得SFDA国家的认可。最主要的更新就是把EGFR和ALK列为常规进行，晚期NSCLC诊断同时，需常规检测EGFR和ALK基因状态，特殊情况除外。 * * * 通过逆转录法将mRNA合成为cDNA，在cDNA基础上，对融合基因断裂点两侧分别设计引物和探针，采用多重PCR技术对融合基因进行检测 肿瘤细胞中存在很强的颗粒状胞浆染色（任何百分比的阳性肿瘤细胞）。 * * * * * * * * ALK靶点及其检测方法 辉瑞肿瘤 赛可瑞 余林 1994年ALK基因异常首次在淋巴瘤中被发现 ALK基因异常首次在间变性大细胞淋巴瘤中被发现 (ALCL), 并因此而得名“ALK” （anaplastic lymphoma kinase）间变性大细胞淋巴瘤激酶 ALK融合到核磷蛋白（NPM）的N-末端部分 (NPM-ALK)导致ALK基因组成性激活。 Science 1994;263:1281–4 Blood 1997;89:1678–85 2007年首次在非小细胞肺癌中发现EML4-ALK融合基因 EML4 EML4–ALK variant 1 HELP 1 496 981 WD Basic 1 496 1059 1 1058 1620 TM Kinase ALK EML4-ALK NMP-ALK Nature 2007;448:561–7 2007年首次在非小细胞肺癌中发现EML4-ALK融合类型，并证实为肺癌的驱动基因。并且越来越多的研究表明ALK融合在NSCLC当中以较为稳定的频率出现，大约5%。 Permanent proliferation & inhibition of apotosis EML4-ALK fusion proteinsilenced bycrizotinib Proliferation & survivalupon ligand bindingto ALK ALK融合突变在蛋白水平的变化 配体 ALK受体 细胞外 细胞内 正常ALK 信号 细胞外 永久扩增和凋亡抑制 细胞外 克唑替尼抑制 EML4-ALK 融合蛋白 病理性ALK信号 克唑替尼作用模式  配体与ALK结合后，扩增和存活 由于与EML4融合，ALK激酶区 异常激活 多效蛋白?肝素结合细胞因子? 随着ALK靶向抑制剂的发现，ALK基因越来越多的受到重视 2007, Soda & Mano 首次发现EML4-ALK基因 2009, Alice T. Shaw 首次出现EML4-ALK阳性 非小细胞肺癌的称谓，并将其 定义为NSCLC的独特亚型 2010, Kwak EL: 证实克唑替尼治疗有效， 但仍沿用EML4-ALK阳性 非小细胞肺癌的称谓 Soda M, et al. Nature 2007; 448(7153):561-566. Shaw AT, et al. J Clin Oncol 2009; 27:424