新型酶制剂讲义.docVIP

新型酶制剂――β-甘露聚糖酶研究进展 ? 植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素及木质素等物质构成。甘露聚糖是植物半纤维素的重要组分，是由β-1,4-D-甘露糖连接而成的线状多聚体，在多糖的侧链上主要有葡萄糖基、乙酰基和半乳糖基等取代基团，图1为甘露聚糖的分子结构示意图。甘露聚糖具有高亲水性，在单胃动物的消化道内大量吸水，增加了消化道内容物的粘度，抵抗胃肠的蠕动，直接影响动物对营养物质的消化和吸收。近年来，随着豆类产品（豆粕等）在动物饲料中的广泛应用，甘露聚糖的抗营养作用也越来越受到重视，在饲料中添加酶制剂是解决这一问题的主要途径。甘露聚糖的完全酶解需要β-甘露聚糖酶（EC3.2.1.78）、β-甘露糖苷酶(EC3.2.1.25)、 β-葡糖苷酶(EC3.2.1.21)、α-半乳糖苷酶(EC3.2.1.22)和脱乙酰酶(EC3.1.1.6)的协同作用，其中β-甘露聚糖酶在饲料中的应用比较广泛。 1. β-甘露聚糖酶的来源和酶学性质研究 β-甘露聚糖酶广泛存在于自然界中，在一些低等动物（如海洋软体动物Littorina brevicula）的肠道分泌液中、某些豆类植物（如长角豆、瓜儿豆等）发芽的种子中以及天南星科植物魔芋萌发的球茎中都发现了β-甘露聚糖酶酶活的存在。而微生物（包括真菌、细菌和放线菌等）则是饲用β-甘露聚糖酶的主要来源， 各种微生物产生β-甘露聚糖酶的条件和所产酶活性的高低、酶的性质和作用方式以及蛋白质一级结构等均有所不同。微生物来源的β-甘露聚糖酶具有活性高、成本低、提取方便以及比动植物来源的有更广的作用pH 值、温度范围和底物专一性等显著特点，备受研究者的重视，其中，细菌中的芽孢杆菌、假单胞菌、弧菌，真菌中的曲霉、青霉、酵母、木霉和放线菌中的链霉菌等产的β-甘露聚糖酶等研究的较多，表1中列出了部分微生物产的β-甘露聚糖酶及其酶学特性。 目前，已有许多不同来源的β-甘露聚糖酶获得了纯化，如田新玉（1993）首先报道了嗜碱性芽孢杆菌Bacillus sp.N16- 5 产生的3 种胞外碱性β-甘露聚糖酶。杨文博（1995）、余红英（2003）、吴襟（2000）分别对地衣芽孢杆菌Bacillus lichienoformis NK- 27产生的碱性β-甘露聚糖酶、枯草芽孢杆菌SA-22产生的中性β-甘露聚糖酶、诺卡氏菌形放线菌Nocardioform actinomycetes NA3- 540C 产生碱性β-甘露聚糖酶的纯化及性质作了报道。在真菌方面，田亚平（1998）、王和平（2003）分别就黑曲霉WX- 96所产的β-甘露聚糖酶、里氏木酶RutC-30 所产的酸性β-甘露聚糖酶进行了酶纯化和性质研究。国外Ademark （1998） 和Yosida（1997）分别报道了黑曲霉、环状芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的纯化和性质。不同微生物所产的β-甘露聚糖酶的分子质量、最适反应pH、等电点、最适反应温度、酶动力学常数、底物专一性等都有一定的差异。β-甘露聚糖酶的分子质量小的只有22 kDa，大的可以达到162 kDa，相差十分悬殊，但大部分在30 kDa～55 kDa。 表1. 部分微生物产生的β-甘露聚糖酶及其性质 菌 株 分子量 最适温度 最 适 pH 参 考 文 献 Bacillus licheniformis __ 50 6.0 Zhang et al Trichoderma harzianum 32.5 55 3.0 Ferreira and Filho Bacillus subtilis 39 50-55 7.0 Zakaria et al Bacillus stearothermophilus 73 70 5.5-7.5 Talbot and Sygusch Aspergillus fumigatus 60 60 4.5 Puchart et al 63 60 4.5 Aspergillus niger 40 __ 3.5 Ademark et al Sclerotium rolfsii 61.2 70 2.9 Gubiz et al Trichoderma reesei 46 75 5.0 Arisan-Atac et al 图1 枯草芽孢杆菌 图2 假单胞菌 真菌来源的β-甘露聚糖酶的作用范围偏酸，一般在pH 4.0～5.5之间，最适反应温度一般在55℃～75℃。如1990年Johnson K G研究的里氏木霉的甘露聚糖酶，最适pH为5.5，最适反应温度为65 ℃；李江华等研究的黑曲霉的甘露聚糖酶，最适pH为5.5，最适反应温度为35℃。细菌和放线菌来源的甘露聚糖酶最适作用pH却常为中性或者偏碱性，最适反应温度为45℃～70℃。细菌中，研究最多的是芽孢杆菌，除嗜