细菌视紫红质膜蛋白在脂质体上的体外定向自组装.pdfVIP

2002年 高分子液晶态与超分子有序态研究进展 华中科技大学出版社 !旦旦 丝：竺竺!!呈垡旦!垫竺型竺查!!堡些!兰竖垡翌璺兰婴竺罂!盟!!!!!璺里型!：i鱼塑：!!塑：兰 细■视紫红质纛蛋白在魔质体上的体外定向自组装拳 黄 力1’ 刘 坚1’ 明 明1’ 刘 嘉1’ 李庆国2’ 丁建东1)·+ 1’复旦大学高分子科学系聚合物分子工程教育部重点室 上海200433 e-mail：jddin91@fudan．edu．cn 2’复旦大学生命科学院生理学与生物物理学系 上海200433 擅要细菌视紫红质(bR)是嗜盐菌质膜上的一种跨膜蛋白，有光趋质子泵功能，在细胞膜上 定向排列。我们通过细菌培养和蛋白提取，获得了相关bR蛋白质，还试图将其和两亲性的小分 子磷脂混合、通过自组装的方式将从质膜上提取的蛋白质整合到磷脂脂质体(细胞模拟物)上。 结果表明：该膜蛋白不仅可以被整合到处于溶致型液晶状态的脂质体膜当中，而且自发地定向排 列。相关机理正在探讨之中。 关t词细菌视紫红质，膜蛋白，自组装，溶致型液晶，脂质体 1．引言 salinarum)紫 membrane，PM)上的一种跨膜蛋白。bR是一种独 膜(Purple 特的光敏蛋白，如图l所示。当bR受到光照，视黄醛分子发 生异构化，由all-trans变为13-cis，并引发一系列热反应，经过 一系列中间态，在约几十毫秒内又回复到基态，从而形成一个 光循环【l，2】。伴随着光循环过程，由于蛋自分子发生了构象变化， 调节了不同基团的plq值，在N端释放一个质子，在C端接受 一个质子，即相当于将一个质子由细胞质传输到细胞外，在膜 的两边产生质子梯度。这就是所谓的光驱质子泵功能13j。需要 圈1细-视紫红质的7个 提到的是，天然细胞中bR蛋白的N端总在细胞膜外侧，C端在 n螺麓跨一结构 胸内倾ll。 ·国家自然科学基金、教育部高等学校优秀青年教师教学和科研奖励基金、973项目和863项目资助。 料通讯联系人。 157 六十年代中期以来，脂质体技术在推动生物膜 的研究进展中作为模式系统起着非常重要的作用。 脂质体(1 iposome)可以定义为一个由双亲的磷脂 分子组成的微细囊泡结构。亲水基团处于囊泡的内 外壁，亲脂基团处于中间，如图2所示。膜壁厚度 大约为5～7个nm单位，囊泡直径为25--一500nm 左右。脂质双层是二维的流体，它的结构是由磷脂 分子的特殊性质决定的。制备脂质体可以采用的方 法很多，我们采用的是振荡加超声的方法，最后通 过离心的方法得到脂质体H’引。 圈2囊羹俸曼维立体结构示意明 2．材料和制鲁 2．1主要实验材料 bR蛋白是按照经典方法从自行培养的嗜盐菌株R1M1中提取分离；pH敏感染料pyranine SIGMA公司出品。 2．2含bR蛋白的卵磷魔麝质体的翻备 液于50mL圆底烧瓶中，在N2流下使溶剂蒸发，使磷脂在瓶底部铺成一薄层。最后加无水乙 醚清洗，以除去残余的溶剂。将bR蛋白样品约3mL(根据蛋白和磷脂摩尔比大约为l：15 左右)用15mL 进行4×3次。将已经超声处理的bR溶液加入铺好磷脂的圆底烧瓶中，加入小玻璃珠在涡旋 振荡器上振荡15rain，使脂质充分水化，形成多层脂质