结球甘蓝抗TuMV基因的分离研究.pdfVIP

结球甘蓝抗TuMV基因的分离研究 J Oliver 3，David 3，夏勇2宋洪元2，宋明2，李成琼2(1华农 雷建军·，曹必好2，ChengbinXiang 重庆，北碚400716，3Department 业大学园艺学院广州，五山510642，2西南农业大学园艺系 0 UniverofScienceand 5001卜201USA) of State sity Technology，Ames，Iowa Botany，Iowa 摘要：以结球甘蓝高抗TuMV自交不亲和系’84075’为材料，构建cDNA文库，采用抗病基因嘲源序 杂交分析表明，该基因以单拷贝形式存在，基因的表达是组成型的，且无组织特异性；序列分析表明，该 基因包含678bp的开放阅读框，与已克隆的抗病基冈有不同程度的同源性。将该基因构建表达载体，并导 入到感病的芥菜后，抗病性有所增强。 关键词：甘蓝，抗TuMV基圆，tutor，基因分离 结球甘蓝是我国的一种重要蔬菜，栽培面积已达几十万公顷，但结球甘蓝病毒病的发生，是其生 产上主要的障碍之一，常给广大菜农造成直接经济损失。结球甘蓝病毒病的毒源为TuMV，是马铃薯 Y病毒组的重要成员，其寄主范围很广，可侵染多种农作物，尤其是对十字花科植物危害严重。在我 国，有关结球甘蓝的抗病育种研究取得很大的进展，己选育出不少抗性材料和抗性强的品种，但针对 结球甘蓝抗TuMV的研究历史短，可利用的资源少，现有的抗TuMV材料，往往伴随经济性状不良而 难用于生产，用常规的方法很难打破它们的连锁关系。 随着分子生物学研究的不断深入，利用植物基因工程手段选育抗病晶种育种显示出巨大潜力。到 目前为止，通过分离克隆植物抗病基因，把抗病基因导入到抗病性弱的作物中，以增强其抗性的成功 研究报道很多，如：已在玉米【1】，番茄口’”，烟草H，砸麻【5]，拟南芥[6”，水稻[8]，甜菜‘91(张增艳 等2004)小麦口…，等作物上克隆出40多个抗病基因或候选抗病基因，这些基因表现出对病毒，细菌， 真菌或线虫抗性。而有关从结球甘蓝分离抗病基因的研究报道少见。从报道的资料看，大多数克隆植 物抗病基因的方法主要为图位克隆法和转座子标签法，这两种方法均需投入大量的人力，物力，耗时。 而根据已知抗病基因的保守序列，利用同源序列法分离抗病基因显示出经济，快捷的优点。白 法在其他植物上扩增抗病基因类似序列，再用它作探针筛选文库得到候选抗病基因后，经过功能鉴定， 最后获得抗病基因。本研究利用抗病基因同源序列法，旨在从甘蓝高抗TuMV的材料中分离出抗TuMV 基因，把所分离到的基因导入到其他抗性弱的十字花科作物中，以提高它们的抗TuMV的能力，同时 为蔬菜抗病育种摸索新的途径。 I材料与方法 1．1植物材料 杂交的F2代分离群体。用于遗传转化的材料为感病的芥菜‘‘蔺市革腰子” 1．2植物总DNA的提取DNA的提取见参考文献(21]。 1．3探针标记用DIG标记试剂盒(Boehringer 加入DNA模板5皿(O．5ug／uL)，ddH2011此，离心3s，沸水中变性Imin，立即冰上冷却，加入DIG 标记引物，离心3s，3713培养过夜，加2止o．2mol／LEDTA(pH8．o)终止反廊。 +国家自然科学基金委员会项目和广东省国际合作项目(2002C50402)资助 work Grant This WaS fromtheNationalNaturalScienceFoundandScienceand supportedby Technology Department， Province． Guangdong