羟丙基β环糊精提高植物甾醇侧链降解反应效率的初步研究.pdfVIP

88 全国第十四届大环化学暨第六届超分子化学学术研讨会论文专辑 羟丙基-B一环糊精提高植物甾醇侧链降解 反应效率的初步研究 申雁冰，马印虎，张立挺，王敏· 天津科技大学 生物工程学院 天津市工业微生物重点实验室，天津(300457) 摘 要：本文对羟丙基．肛环糊精(HP．邸D)提高植物甾醇(PS)侧链降解反应效率的作用 机理进行了初步研究．结果表明HP．}CD可以显著增加植物甾醇、雄甾-4．烯．3，17．二酮(AD) 和雄甾-l，4·二烯·3，17-二酮(ADD)的溶解度，添加37．3 g·L．1的HP．p-CD时，植物甾醇的溶 解度由对照的O．66n培·Lq增加到27．42mg·L．1，增溶41倍；在植物甾醇侧链降解反应中，作 为超分子主体化舍物的HP．pCD通过包结客体AD(D)，降低了产物的抑制作用． 关键词：羟丙基．B．环糊精；侧链降解；植物甾醇 植物甾醇(PS)是一类强疏水性化合物。在植物甾醇侧链降解反应过程中，底物与生物 酶不能有效接触，制约了其生物转化效率的提高。p环糊精具有环外亲水、环内疏水性，使 其能作为超分子主体包结疏水性甾体，从而提高甾体的溶解度，同时作为底物／产物储存库， 降低底物／产物毒性。羟丙基-肛环糊精(HP．争CD)是p．环糊精的羟烷基化衍生物，与母体 pCD相比，具有水溶性好、热稳定性高、溶血作用显著降低等优点【Il。 国内外关于环糊精在甾体微生物转化中的应用已有一些报道：urka等【2】人研究发现，在 黑根霉对黄体激素ll-0【-羟化的生物转化过程中，B．CD作为增溶剂解决了甾体浓度为限速步 骤的的动力学，并依据米氏方程，建立了数学模型，在B．CD存在的情况下，反应速率提高 了近2倍。M粕osroi等【3J人研究表明，HP．∞D可以提高黄体酮侧链降解生成雄甾．1，4．二烯 包结使底物溶解度增加。关于pCD对转化率的提高，Hesselink【4】认为是由于}CD包结甾 体，提高了甾体的溶解度，他在分枝杆菌N刚u．B3683降解植物甾醇生成雄甾-4．烯．3。17． h 二酮(AD)研究中证实p-CD与底物形成摩尔比为2：l的包结物，AD的收率从转化175 后的35％-40％提高到转化120h的80％以上。本文初步研究了HP．B．CD提高植物甾醇侧链 降解反应效率的机理，以期为环糊精在植物甾醇侧链降解反应中的应用提供理论依据。 1．材料与方法 1．1试剂 公司；植物甾醇，购自武汉凯迪精细化工有限公司；羟丙基．p．环糊精(取代度6．52)，购自 西安德立生物化工有限公司；其它试剂均为分析纯。 1．2菌种与培养基 菌种：分枝杆菌J蚍06口c纪，-f啪sp．NⅪ也B．3683。 种子培养基@·L‘1)：磷酸氢二钾0．5，硫酸镁0．5，柠檬酸铁铵0．05，柠檬酸2，硝酸铵 基金项目：国家自然科学基金项目． 疆讯联系人：王敏，E·mII：函in剑豇衄：四女：姐· 第44卷专辑 西北师范大学学报(自然科学版) 89 2，碳酸钙lO，甘油20，葡萄糖5。 发酵培养基Q·L．1)：葡萄糖lO，柠檬酸2，柠檬酸亚铁铵0．05，硫酸镁0．5，磷酸氢- 钾O．5，磷酸氧-铵3．5，植物甾醇5，pH调至7．2。 1．3 HP—p．CD对PS和AD(D)增溶作用 1．3．1 HP．p．cD对Ps的增溶作用的测定 配制37．3 r·min一，28℃摇床 g·L-I的HP—p．CD水溶液，加入过量的PS，然后置于120 上振荡处理24 h，用O．45“m水膜过滤，制得HP．pCD．Ps饱和水溶液，用两倍乙酸乙酯萃 取，取乙酸乙酯相挥发至干，加入一定量乙酸乙酯溶解，’气相色谱法测定其溶解度pJ。 1．3．2 HP．pCD对AD(D)的增溶作用的测定 配制37．3 r·min一，28℃ g-L