冰冻解冻去甘油红细胞中甘油残留量.doc

高碘酸钠法检测冰冻解冻去甘油红细胞中甘油残留量 杨夏 关键词：高碘酸钠；冰冻红细胞；甘油 为了延长红细胞的保存期，国内外普遍采用甘油作为保护剂对红细胞进行深低温冰冻保存[1]，此项技术有效缓解了临床稀有血型紧急用血状况，对采供血机构调剂血液库存储备以应对血液偏型或突发事件所导致的“血荒”也起到了一定作用。需要注意的是：甘油具有保水作用，其意外进入人体会导致机体血容量增加，引起患者不适，在患者有妊娠、高血压等自身血容量比较高的情况下，不良症状会加重，严重者甚至有生命危险。在使用冰冻解冻红细胞之前，必需经过洗涤去除甘油保护剂，要控制洗后红细胞中甘油残留量≤10g/L作为底线[2]，消除甘油对人体产生的不良作用，保证输注后的红细胞能够正常发挥生理功能。我站已在2009年将冰冻解冻去甘油红细胞中甘油残留量的监测作为质量控制的常规工作，开展此项检测工作中我们遇到过一些问题，并对问题进行了探讨，现将我站的检测方法和经验介绍如下： 1材料与方法 1.1样品来源 2009～2011年本站制备的冰冻解冻去甘油红细胞血液。 1.2试剂与仪器 甘油(天津市百世化工有限公司)，钨酸钠(天津市河东区红岩试剂厂)，H2SO4(四川西陇化工厂)，高碘酸钠(天津市博迪化工有限公司)，乙二醇(天津基准化学试剂有限公司)，氢氧化钠(天津市大茂化学试剂厂)，邻苯二甲酸氢钾（纯度为:99.8%，天津市光复精细化工研究所），分析天平（精密到0.0001g，德国赛多利斯）。 1.3甘油标准溶液的配制 精密称取甘油10.1 g(纯度为99%) ，置于100 ml的容量瓶中, 用生理盐水溶解并稀释至刻度, 配成100 g/L 的储备液。分别取储备液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0ml置于100 ml的容量瓶中, 用生理盐水稀释至刻度, 制成含甘油2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0g/L的甘油标准溶液。 1.4 甘油含量测定 1.4.1 制备血滤液 准确吸取混匀后冰冻解冻去甘油红细胞5、7.5、10、15ml，依照表1所示加入相应量的蒸馏水，混匀，静置3～5分钟，再加入相应量的16.5%钨酸钠及1N H2SO4，充分混匀，用定性滤纸过滤制备得到血滤液。 1.4.2 甘油残留量的测定 精密吸取血滤液10ml，加入2.14%高碘酸钠溶液50 m l，摇匀，暗处放置15 m in后，加50%乙二醇溶液10m l，摇匀，暗处放置20m in，加酚酞指示剂0.5m l，用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定至红色，30秒内不褪色，滴定结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于9.21mg的甘油[3]。根据消耗氢氧化钠溶液的毫升数，依照下列公式计算样品甘油含量。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　滴定NaOH浓度　　　　　　　 V 甘油含量(g/ml)= NaOHml数(样品－空白)X0.00921X　　　　　　÷血滤液ml数× 　　　　　　 0.1　　　　　　　　　　　S 注意：以上所用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定液使用前要进行浓度标定，标定步骤为：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.6g，精密称定，加新沸过的冷水（避免水中的C02对标定的影响）50ml振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定；在接近终点时应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.1mol／L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾[3]。依照下列公式计算滴定液浓度： 滴定NaOH浓度=邻苯二甲酸氢钾称取量X邻苯二甲酸氢钾纯度X0.1/（滴定ml数X0.02042） 2结果 2.1 对同一份冰冻解冻去甘油红细胞血液，分别取不同量（5ml、7.5ml、10ml、15ml）样品制备血滤液测定甘油含量，各取样量平行做5次，应用SPSS 13.0统计软件，做t检验，结果：7.5ml、10ml取样量与15ml取样量测定结果比较，P值＞0.05，分别为0.3281、0.6785，结果无显著性差异，5ml取样量P值为0.000，有显著性差异。结果见表1。 表1 不同取样量制备血滤液检测甘油含量结果比较 试剂 ml（n=5） ml（n=5） ml（n=5） ml（n=5） 测定样品（S） 15 10 7.5 5 水 75 50 37.5 25 16.5% Na2WO4 6 4 3 2 1N H2SO4 7.5 5 3.75 2.5 总体积（V） 103.5 69 51.75 34.5 测量值（±s）g/L 9.766±0.0403 9.776±0.0334 9.791±0.028 9.0