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Agilent 1290 In?nity 多中心切割二维液 相色谱解决方案 作者 Stephan Buckenmaier 安捷伦科技有限公司 德国瓦尔特布隆 技术概述 摘要 本技术概述介绍了与一维液相色谱相比，Agilent 1290 In?nity 多中心切割二维液相色谱 解决方案显著提高了分离性能，并将目标物中心切割分析提升到了更高的水平。创新性 的接口技术有助于在运行二维循环时实现一维组分的驻留。通过这种方式可以将多个一 维峰在较高频率下进行中心切割，以此得到复杂样品中目标化合物的详细信息。Agilent 1290 In?nity 多中心切割二维液相色谱解决方案具有如下特点： ? 测定复杂样品中目标化合物的卓越分离性能 ? 进行第二维分析时实现多中心切割驻留的创新性技术 ? 方法开发及数据分析中直观的用户帮助 ? 确保结果可靠性的自动化操作 ??????? A ?? 5 ????? 3 2 ?? 6 ?? 7 ?? 8 1 4 ??????? B ?? 2 ?? 3 ?? 4 5 6 8 7 ????? ??? 前言 通过与常规一维液相色谱的比较，证明了二 维液相色谱 (2D-LC) 能够大大提高分离性能。 这在分析复杂样品时非常重要。原则上，在 线二维液相色谱系统包括通过二维进样器连 接的两台独立 LC 仪器。而二维液相色谱实 验则由一维色谱开始。对一维色谱柱中的洗 脱液进行采样，然后将其进样至二维色谱柱 中进行进一步分析。分离行为主要由选择性 差异主导。在理想情况下，当第一维中的分 离机制与第二维正交时，分离能力将为两个 维度各自分离能力的乘积1。 ??? 1 ????? ???? ????? ??? 系统中最常用的工具为交替式双定量环接 口2。图 1 展示的安捷伦 2 位/4 通双阀专为 二维液相色谱应用而开发，有助于形成对称 流路。从设计理念上看，这款阀最大限度减 少了二维色谱柱进样口的压力波动（这种波 动在切换时不可避免），因而大大延长了色 谱柱寿命3。二维液相色谱从阀处于位置 1 时开始，此时一维洗脱液流经定量环 1（蓝 色流路）。将阀切换到位置 2 后可将定量 环 1 中的样品进样至二维循环中。二维分离 一经完成后即可进样定量环 2 中的样品。随 后再将这一过程重复进行。 ??? ??? 2 ????? ???? ????? ??? ????? ??? 1 2 3 1 4 8 5 7 6 ??? 2 ????? ??? ????? ????? ??? 1 2 3 1 4 8 5 7 6 ??? 2 ????? ??? ??? ????? 图 1. 二维液相色谱系统示意图，其中以蓝色显示第一维的模块和流路，以红色显示第二维的模块和流路。图 中通过安捷伦 2 位/4 通双阀将第一维和第二维相互连接。此双定量环接口处于位置 1（上图）和位置 2（下 图）时如图所示 2 二维液相色谱可以分为两种主要的操作类型， 即全二维和中心切割。每种模式的应用均取 决于任务类型。 多中心切割二维液相色谱 本技术概述介绍了安捷伦多中心切割二维液 相色谱解决方案。此方案通过在运行二维 全二维液相色谱主要用于分析组学类应用中 发现的高度复杂的未知混合物、天然产物以 及生物大分子4。它的任务是收集尽可能多 的信息。因此，应对一维色谱柱中洗脱出的 每个一维峰（通常为全部一维洗脱液）进行 采样，并将其转移至第二维中。采样应频繁 进行，以避免在第一维中成功分离的组分发 生再次混合5。达到这些条件需要运行具有 循环时驻留多个切割组分而避免了数据丢失。 如图 3 所示，对每个一维峰进行中心切割， 并且较高频率的采样实现了对绿色峰的详细 检测。 ?????? ?? 1 ?? 2 快速梯度、短色谱柱以及高流速二维和低流 速一维的典型二维液相色谱，因为二维循环 的持续时间通常与采样时间相等。 中心切割二维液相色谱的用途与全二维色谱 ?????? 不同，其目的在于仅测定高度复杂样品中具 有代表性的一种或少数几种目标化合物。如 图 2 所示，仅取一维峰的一个特定组分在第 二维中进行再分析。如此打破了采样时间和 二维循环之间的连接，使两个维度均可在最 佳条件下运行。使用更长的二维梯度以及具 ?????? 有更高分离效率的色谱柱通常可以获得比全 二维模式更好的色谱性能，并且无需降低第 一维的流速6。然而，在这种条件下获得的 图 2. 中心切割二维液相色谱的图解说明 ?????? 色谱质量的提高需要付出一定代价，那就是 可能使某些信息丢失。例如，图 2 中的示 意图表明，在切割 1 和切割 2 的二维循环过 程中分别丢失了橙色、黄色和蓝色的一维峰。 插图则表明绿色峰中包含更多化合物。 ?????? ?????? 图 3. 多中心切割二维液相色谱的图解说明 3 新