葡萄糖氧化酶有机改性溶胶凝胶包埋及传感测定.pdfVIP

2006年l 1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 葡萄糖氧化酶有机改性溶胶．凝胶包埋及传感测定 王旭东1，辛玲玲1，陈海玲2，陈曦+1 (1．厦门大学化学化工学院化学系现代分析科学教育部重点实验室，厦门361005： 2．福州大学食品安全分析与检测技术教育部重点实验室，福州350002) 酶催化反应具有高效、快速、高选择性等特点，因此受到了广泛的关注。但是未固定化的酶 通常不稳定，难以重复使用，所以固定化酶技术显得十分必要。本文通过二甲基．二甲氧基硅烷 (DiMe．DMOS)改性溶胶．凝胶杂化PVA技术对葡萄糖氧化酶进行了有效的包埋。 mL mol／L 平底反应瓶中，逐滴振荡加入一定体积的O．01 HCI，60℃水浴中搅拌2h。取所得凝胶液加 min后于玻片上均匀涂布成膜，烘箱中干燥24h 入饱和的【Ru(dpp)32+】的THF溶液，旋涡振荡1 J。 后得氧传感膜，备用11 用上述方法制得凝胶液，与5wt％PVA水溶液按一定比例混合，并加入～定体积含葡萄糖 氧化酶的缓冲溶液。充分振荡均匀，在氧传感膜表面均匀涂布成膜，置于室温通风处干燥。放入 pH为7．0的磷酸缓冲溶液中4℃储存。 将在冰箱内4℃保存的传感膜取出，放入样品池中，于空气中静置放置。待输出一恒定数字 信号后，向样品池中加入一定体积的葡萄糖溶液，在静态条件(不搅拌，不通空气，测量池保持 密封)下响应f21。此时，葡萄糖氧化酶催化氧化葡萄糖，消耗溶液中的氧，使得氧对荧光的猝灭 逐渐减弱，氧浓度的变化能间接反映溶液中葡萄糖的浓度。产生的光信号通过光电转换放大后由 计算机采集并记录，得到一条酶反应动力学曲线。 图l传感器在0．5raM葡萄糖溶液中的典型响应曲线 图2前0．30分钟内的曲线拟合 图l所示的为包埋在有机改性溶胶．凝胶中的葡萄糖氧化酶催化氧化葡萄糖的酶反应动力 学曲线，从曲线中我们可以看出，在反应起始阶段，由于底物的浓度较高，反应速率较快，随着 底物浓度的降低和生成物浓度的升高，反应速率逐渐下降，反应的初速率和底物的浓度存在一定 的线性关系。 ‘通讯联系人 2006年l1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 酶反应是一个很复杂的过程，其动力学过程一般遵循米氏方程，从米氏方程l，：!竺!皇』我 如+【踟 们可以得出，当K。【S】时，酶促反应可以看成一假一级反应。据报道，葡萄糖氧化酶的K。值 期，我们可以将酶促反应简化成一假一级反应。如图2所示，我们取前0．30分钟内的曲线进行 拟合，用该曲线的斜率来表示某一底物浓度下的反应初速率。通过研究发现，反应初速率和底物 的浓度之间存在一定的线性关系。 采用0．50mM的葡萄糖溶液做底物进行重现性实验，发现该方法的重现性很好，相对标准偏 差RSD=I．50％，说明用曲线拟合法处理数据是合理的。 参考文献： Lin，Lai-LongXiao，Sha Zhao，Xi and [1]Ling Huang，Li Chen，etc．Biosensor 21：1703．1709． [2]赵丽，肖来龙，林玲，陈 andGWblf．Biosensorsand [3]K．Bohmhammel，R．Hfittl，K．Pritzkat 2046—2051． ImmobiledGlucoseOxidasein Modified Organic Sol--