蛋白质胰蛋白酶水解过程双位点漏切肽段的质谱鉴定.pdfVIP

第 34卷 第 1期 质 谱 学 报 Vo1．34 No．1 2013年 1月 JournalofChineseMassSpectrometrySociety Jan．2013 蛋 白质胰蛋 白酶水解过程双位点漏切肽段的质谱鉴定 王 勇 ，李水明 ，何曼文 ，邹永东 (1．深圳大学生命科学学院，深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室，广东 深圳 518060； 2．深圳大学生命科学学 院，深圳市微生物基 因工程重点实验室 ，广东 深圳 518060) 摘要：为说明胰蛋 白酶漏切位点数 目设置对蛋 白质搜库结果的影响，采用基质辅助激光解吸电离一串联飞行 时间质谱 (MALDI-TOF／T0F)高置信度地鉴定了细胞色素 c和大豆脱落胁迫成熟蛋 白。在细胞色素 C和 大豆脱落胁迫成熟蛋白的胰酶水解液 中分别发现 了2个和 4个双胰酶漏切位点肽段 ，确认 了文献中报道 的 当赖氨酸和赖氨酸相邻或赖氨酸、精氨酸各 自与天冬氨酸或者谷氨酸相邻时，会引起胰蛋 白酶的漏切。此 外，还发现组氨酸一赖氨酸一异亮氨酸／丙氨酸结构也有此现象。本研究中检测 出漏切肽段并没有 明显提高序 列覆盖率，但显著增加 了蛋 白质鉴定结果的确定性。在实际样品分析中如将漏切数设置为 1有可能产生肽 段鉴定的假 阴性 。 关键词：胰蛋 白酶；基质辅助激光解吸电离一串联飞行时间质谱；细胞色素 c；大豆脱落胁迫成熟蛋 白 中图分类号：O657．63 文献标志码：A 文章编号：1004—2997(2013)01—0029—06 doi：10．7538／zpxb．2013．34．01．0029 Identificati0nofTrypticPeptides withDoubleM issedCleavageSitesbyM assSpectrometry W ANG Yong ，LIShui—ming ，HEM an—wen ，ZOU Yong—dong (1．ShenzhenKeyLaboratoryofMarineBioresourcesandEcology，CollegeofLifeScience， ShenzhenUniversity，Shenzhen518060，China； 2．ShenzhenKeyLaboratoryofMicrobialGeneticEngineering，CollegeofLifeScience， ShenzhenUniversity，Shenzhen518060，China) Abstract：Toinvestigatetheinfluenceofmissed cleavagenumbersoftrypsin fordatabase searchingresults，CytochromeC andabscisicstressripening—likeproteinwereidentifiedby MALDI—TOF／TOFmassspectrometry．Twoandfourtrypticpeptideswithdoublemissed cleavagewerefoundinthedigestsofcytochromeCandofabscisicstressripening—likepro tein，respectively．ItwasfoundthattWOmissedcleavagewillhappewhen tWOlysineresi— duesneighbortoeachotherorlysinesandargininesneighborwith an asparticacidorglu— tamicacidresidue．Itwasobservedthatthisphenomenonwasrelatedtohistine—lysine—isole— unine／alanineseque