人脐带间充质干细胞分化胰岛样细胞过程中胰岛素和巢蛋白的表达.docVIP

人脐带间充质干细胞分化胰岛样细胞过程中胰岛素和巢蛋白的表达 申 义1，王意忠1，时 瀚1，山 霞1，王琳琳1，崔晓兰2(1北京大学航天临床医学院血液内分泌科，北京市 100049；2中国中医科学院中药所药理室，北京市 100700) 引用本文：申义，王意忠，时瀚，山霞，王琳琳，崔晓兰. 人脐带间充质干细胞分化胰岛样细胞过程中胰岛素和巢蛋白的表达[J].中国组织工程研究，2016，20(50):7500-7506. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.50.008 ORCID: 0000-0002-3419-4566(王意忠) 文章快速阅读： 文题释义： 巢蛋白：是神经干细胞、胰腺干细胞的标志分子，被列为第Ⅵ类中间纤维，其结构和分子质量与其他的中间纤维成员有差异。神经干细胞和胰岛干细胞在胚胎发育早期都处于特征性的后有丝分裂，表达许多相同的表型，并且都可以分泌巢蛋白，在体外一定条件下，巢蛋白阳性细胞能够定向分化为胰腺的内、外分泌细胞。 双硫腙：俗称铅试剂，化学试剂。蓝黑色结晶性粉末，易被空气氧化，可加入二氧化硫水溶液保护；易溶于四氯化碳和氯仿，其溶液不稳定，微溶于乙醇，不溶于水。胰岛细胞胞浆内含有高浓度锌离子，其可促进形成2-锌-胰岛素六聚体，而后者可以调节人体血糖水平，因此检测细胞中锌离子水平对鉴定胰岛细胞具有重要价值。双硫腙能特异性的和锌离子螯合成棕红色络合物，使胰岛细胞显色，其他细胞不显色。 摘要 背景：国内外研究证实脐带间充质干细胞可定向诱导分化为胰岛样细胞，但分化过程中胰岛素与巢蛋白表达的变化等相关研究甚少。 目的：观察人脐带间充质干细胞向胰岛素样细胞分化过程中胰岛素与巢蛋白表达的变化。 方法：采用UltraCULTURE培养基在体外培养人脐带间充质干细胞，取培养的第3代细胞，按照两阶段诱导方案将其定向诱导分化为胰岛样细胞，第1阶段：在UltraCULTURE培养基中加入4 nmol/L 活化素A，25 μg/L表皮生长因子，100 μg/L β-神经生长因子，10 mmol/L尼克酰胺，诱导培养至14 d。第2阶段：在UltraCULTURE培养基中加入1%胰岛素-转铁蛋白-硒，10 mmol/L尼克酰胺，10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子，继续诱导培养14 d。在诱导分化过程中，采用流式细胞技术检测分化细胞巢蛋白及胰岛素的表达，双硫腙染色鉴定胰岛样细胞团中锌离子的表达。 结果与结论：①诱导分化为胰岛样细胞过程中胰岛素水平逐渐增高，至28 d达到较高水平，未诱导组胰岛素表达呈阴性；②诱导分化第14天，巢蛋白表达水平达到最大，随着诱导时间延长表达水平逐渐下降；③脐带间充质干细胞诱导28 d形成胰岛样细胞团，双硫腙染色阳性；④实验将脐带间充质干细胞成功诱导分化为胰岛样细胞，并且随着定向分化细胞的变化，细胞胰岛素与巢蛋白表达水平也出现相应的变化。 关键词： 干细胞；脐带脐血干细胞；脐带间充质干细胞；胰岛样细胞；诱导分化；胰岛素；巢蛋白 主题词： 脐带；间质干细胞；胰岛素分泌细胞；胰岛素；组织工程 基金资助： 航天中心医院科研基金(KY-201003)，课题名称：人骨髓间充质干细胞向胰岛细胞定向分化的研究 Changes of insulin and nestin expression during the differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells into islet-like cells Shen Yi1, Wang Yi-zhong1, Shi Han1, Shan Xia1, Wang Lin-lin1, Cui Xiao-lan2 (1Department of Hematology and Endocrinology, Peking University Aerospace School of Clinical Medicine, Beijing 100049, China; 2Pharmacology Laboratory, Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700,China) Abstract BACKGROUND: Domestic and international studies have confirmed that human umbilical cord mesenchymal stem cells could be induced to d