主讲教师柳俊博士、教授第四章植物主要组织培养技术（.pdfVIP

华中农业大学创建国家精品课程——细胞工程学 文本教案(第四章) 主讲教师：柳 博士、教授 第四章 植物主要组织培养技术（5 学时） 教学目的与要求： 掌握植物组织培养的主要技术，特别是茎尖脱毒原理，花药培养获得单倍体以及幼胚培 养技术的应用。 第一节、植物脱毒及快速繁殖技术 一、 概念与意义 意义：能够有效地保持优良品种的特性； 生产无病毒种苗，防止品种退化； 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； 节约耕地，提高农产品的商品率； 便于运输。 目前受病毒危害严重影响生产的有： ? 大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草。 ? 蔬 菜：白菜、大蒜、葱、番茄、萝卜。 ? 果 树：柑橘、苹果、草莓、香蕉。 ? 花 卉：香石竹、各种菊花、天竹葵、紫罗兰等 块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物，每年相当一部分产品要用留作种。如： 大 蒜：留种量占产量的五到八分之一。 马铃薯：留种量占产量的十分之一。 贝 母：留种量占产量的三分之一。 二、植物的脱毒技术 1．基本原理 病毒在植物体内的分布具有不均匀性 理论假说： (1)、能量竞争 病毒核酸和植物细胞分裂时DNA 合成均需要消耗大量的能量，而分生 组织细胞本身很活跃，其DNA 合成是自我提供能量自我复制，而病毒核酸的合成要靠植物 提供能量来自我复制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了病毒核酸的复制。 (2)、传导抑制 病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的，但在分生组织中， 维管组织还不健全，从而抑制了病毒向分生组织的传导。 (3)、激素抑制 在分生组织中，生长素和细胞分裂素水平均很高，因而阻滞了病毒的 侵入或者抑制病毒的合成。 (4)、酶缺乏 1969 年，Stace-Smith 提出，可能病毒的合成需要的酶系统在分生组织中 缺乏或还没建立，因而病毒无法在分生组织中复制。 (5)、抑制因子 1976 年，Martin-Tanguy 等提出了抑制因子假说，认为在分生组织中存 华中农业大学创建国家精品课程——细胞工程学 文本教案(第四章) 主讲教师：柳 博士、教授 在有某种抑制因子。 茎尖脱毒是控制植物病毒的有效途径 (1)、药物防治病毒病效率低， (2)、抗病毒育种步履艰难 (3)、组织培养的高效隔 防治了病毒的再侵染 2 ．植物脱毒的技术规程 * 母体植株的选择和预处理 母体的选择：欲脱毒材料的品种典型性；外植体健康程度选择。 预处理： A B C 生 热处理区 长 高 温 温 度 生长区 无损伤 脱毒区 热致死区 ? 香石竹在 3 ～40°C 条件下经两个月处理可除去全部病毒。 ? 菊花在 35～3 °C 的条件下处理 60 天可使病毒失活。 ? 马铃薯在 37°C 条件下处理 10～20 天能除去卷叶病毒。 ? 柑橘－速衰病毒、黄化病毒需在 40°C/30°C 条件下处理 7～12 周。 鳞皮病毒需要在 40°C/30°C 条件下处理 周。 啐叶病毒需要在 50°C 条件下处理 3～22 小时。 亚洲青果病毒在 50°C 条件下处理 30～40 分钟。 * 茎尖分生组织培养再生植株 茎尖分生组织培养有两个概念：shoot tip －shoot apex ； ap