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生物质谱技术在蛋白质组学中的应用 （北京大学药学院 杨春晖 学号 一、 前言[1，2] 基因工程已令人难以置信的扩展了我们关于有机体DNA序列的认识。但是 仍有许多新识别的基因的功能还不知道，也不知道基因产物是如何相互作用从而 产生活的有机体的。功能基因组试图通过大规模实验方法来回答这些问题。但由 于仅从DNA序列尚不能回答某基因的表达时间、表达量、蛋白质翻译后加工和 修饰的情况、以及它们的亚细胞分布等等，因此在整体水平上研究蛋白质表达及 其功能变得日益显得重要。这些在基因组中不能解决的问题可望在蛋白质组研究 中找到答案。蛋白质组研究的数据与基因组数据的整合，将会在后基因组研究中 发挥重要作用。 目前蛋白质组研究采用的主要技术是双向凝胶电泳和质谱方法。双向凝胶电 泳的基本原理是蛋白质首先根据其等电点，第一向在 pH 梯度胶内等电聚焦，然 后转 90 度按他们的分子量大小进行第二向的 SDS分离。质谱在 90 年代 得到了长足的发展，生物质谱当上了主角，蛋白质组学又为生物质谱提供了一个 大舞台。他们中首选的是 MALDI-TOF ，其分析容量大，单电荷为主的测定分子 量高达 30 万，干扰因素少，适合蛋白质组的大规模分析。其次 ESI 为主的 LC-MS 联机适于精细的研究。本文将简介几种常用的生物质谱技术，并着重介绍生物质 谱技术在蛋白质组学各领域的应用。 二、 生物质谱技术[3，4] 1．电喷雾质谱技术（ESI ）[5] 电喷雾质谱技术( Electrospray Ionization Mass Spectrometry , ESI - MS) 是在 毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细 小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大 量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气 相。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子, 使质量电荷比(m/ z) 降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展了分子量的分析范围, 离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电荷数算出。 2 ．基质辅助激光解吸附质谱技术（MOLDI ）[5-7] 基质辅助激光解析电离（MOLDI ）是由德国科学家Karas和Hillenkamp发现 的。将微量蛋白质与过量的小分子基体的混合液体点到样品靶上，经加热或风吹 烘干形成共结晶，放入离子源内。当激光照射到靶点上时，基体吸收了激光的能 力跃迁到激发态，导致蛋白质电离和汽化，电离的结果通常是基体的质子转移到 蛋白质上。然后由高电压将电离的蛋白质从离子源转送到质量分析器内，再经离 子检测器和数据处理得到质谱图。TOF质量分析器被认为是与MALDI 的最佳搭 配，因为二者都是脉冲工作方式，在质量分析过程中离子损失很少，可以获得很 高的灵敏度。TOF质量分析器结果简单，容易换算，蛋白质离子在飞行管内的飞 行速度仅与他的(m/z)-1/2成正比，因此容易通过计算蛋白质离子在飞行管内的飞 行时间推算出蛋白质离子的m/z值。与传统质量分析器相比，更易得到高分辨率 和高测量精度；速度快，离子飞行时间仅为几个μs和约 100μs之间；质量范围宽， 可以直接检测到几十万道尔顿的单电荷离子。飞行时间质量分析器被认为是 21 世纪最有应用前景的质量分析器。 3 ．傅立叶变换－离子回旋共振质谱（FT-ICR MS ）[8，9] 傅立叶变换-离子回旋共振质谱法(FT-ICR MS)是离子回旋共振波谱法与现 代计算机技术相结合的产物。傅立叶变换-离子回旋共振质谱法是基于离子在均 匀磁场中的回旋运动, 离子的回旋频率、半径、速度和能量是离子质量和离子电 荷及磁场强度的函数, 当对离子施加与其回旋频率相同的射频场作用时, 离子 将同相位加速到一较大的半径回旋, 从而产生可被接受的类似电流的信号。傅立 叶变换-离子回旋共振质谱法所采用的射频范围覆盖了欲测定的质量范围,所有 离子同时被激发, 所检测的信号经过傅立叶变换, 转换为质谱图。其主要优点 有：容易获得高分辨；便于实现串极质谱分析；便于使用外电离源并与色谱仪器 联用。此外，他还有灵敏度高，质量范围宽，速度快，性能可靠等优点。 4 ．快原子轰击质谱技术（FABMS ） 快原子轰击质谱技术( Fast Atom Bomebardment Mass Spectrometry , FABMS) 是一种软电离技术,是用快速惰性原子射击存在于底物中的样品,使样