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用于mAb和ADCLCMS分离的

用于 mAb 和 ADC LC/MS 分离的 PLRP-S 聚合物型反相色谱柱 完整和片段化 mAb 与 ADC 的分析 应用简报 生物治疗药物与生物制药 作者 摘要 Suresh Babu C.V. 本应用简报介绍了聚合物型反相色谱柱在单克隆抗体 (mAb) 和抗体药物偶联 安捷伦科技公司 物 (ADC) 等生物大分子表征中的应用。通过研究完整和片段级 mAb 了解聚 合物色谱柱的性能。结果表明该色谱柱具有卓越的分离性能,并适用于 mAb 和 ADC 的常规 LC/MS 分析。 前言 单克隆抗体 (mAb) 和抗体药物偶联物 (ADC) 是具有异质性的治疗分子 [1]。 药物开发过程中可对这些分子进行各种修饰,因此需要全面的表征来确保 安全性和药效。反相液相色谱与质谱检测结合最常用于 mAb 和 ADC 的初 步表征。选择正确的液相色谱柱和方法对于获得可重现的高分离度分离和 高质量质谱数据至关重要。通常,在传统硅胶反相色谱柱的流动相中使用 甲酸(FA,一种可用于质谱的离子对试剂)可导致总离子流图 (TIC) 峰形变 差,从而影响 LC/MS 结果(分离度、灵敏度、质谱信号、准确分子量信息 等等)。因此,液相色谱柱必须与甲酸条件兼容,以便改进生物大分子的 LC/MS 分析。 本研究使用聚合物型反相色谱柱 (Agilent PLRP-S) 展示了 条件 mAb 和 ADC 的 LC/MS 分析。PLRP-S 柱含有硬质、大孔 Agilent 1290 In?nity 液相色谱系统 的球形聚苯乙烯和二乙烯基苯填料。这些填料在整个 pH 色谱柱: Agilent PLRP-S, 2.1 × 50 mm, 5 μm, 1000? 范围内具有物理和化学稳定性。这些填料本质上是疏水 (部件号 PL 1912-1502) 的,因此既没有键合相也没有烷基配体需要进行反相分 进样量: 1 μL 离,从而确保了这种高重现性材料不含硅醇基与重金属 样品恒温箱: 5 °C 离子。本文使用 PLRP-S 色谱柱结合 LC/MS 方法对 ADC 流动相 A : 0.1% 甲酸的水溶液 等多种治疗性 mAb 进行了分析。该方法可获得更好的 流动相 B : 0.1% 甲酸的乙腈溶液 LC/MS 结果,可实现完整和片段化 mAb 与 ADC 的精确 梯度: 完整 片段 → →

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