酵母不对称还原4氯乙酰乙酸乙酯的研究.pdf

M008 酵母不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯的研究 蒋晓霞 林建平 敬科举 刘樱 徐志南 岑沛霖 （浙江大学生物工程研究所，浙江 杭州 310027） 摘 要 从实验室保藏的七株酵母出发，筛选出具有较高产物得率和对映体过量的菌株——木兰假丝酵母。 研究了单相体系木兰假丝酵母还原 4-氯乙酰乙酸乙酯时共底物种类及浓度、反应温度、pH值和底物添加量 等因素对产物得率和立体选择性的影响。单相体系在高底物浓度时底物抑制严重，水/乙酸丁酯两相体系可 降低底物抑制的影响。 关键词 不对称还原 4-氯乙酰乙酸乙酯 (S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯 酵母细胞 对映体过量 ASYMMETRIC REDUCTION OF ETHYL 4-CHLORO- 3-OXOBUTANOATE BY YEAST LIN Jianping, JIANG Xiaoxia, XU Zhinan, JING Keju, LIU Ying and CEN Peilin （Institute of Bioengineering，Zhejiang University，Hangzhou 310027，Zhejiang，China） Abstract: Among the seven yeast strains capable of reduction ethyl 4-chloro-3-oxobutanoate to ethyl (S)-4-chloro-3-hydrobutanoate we screened, Candida magnoliae the highest activity and stereo-selctivity, and was used for the subsequent study. The effects of the co-substrast their concentrations, temperature, pH, as well as the amount of substrate concentration on the yield and enantiomeric excess (e.e.) of product in mono-phase system were examined in details.While the results show that the use of two-phase system can alleviate the inhibition of both substrate and product.. Keywords: asymmetric reduction, ethyl 4-chloro-3-oxobutanoate, ethyl (S)-4-chloro-3-hydro butanoate 引 言 手性药物是目前药学界最为关注的话题之一。含手性中心的化合物有多种对映体，它们在 人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著差异 [1] 。具有光学活性的β-羟基酯类手性醇化合物 是一类重要的手性药物中间体[2]。S-CHBE（ethyl (S)-4-chloro-3-hydrobutanoate，(S)-4-氯-3-羟基 丁酸乙酯）可用于合成HGM-CoA还原酶抑制剂[3]和β-1，4－二氢吡啶类钙离子通道阻断剂等药 物[4]，具有重要的应用价值。目前，生产手性醇的主要方法有化学法和生物法两种。生物法在 制备高对映体过量的手性化合物方面具有效率高、成本低、装置简单、对环境污染小等优势。 利用酶的立体选择性能够合成一些化学方法难以合成的手性中间体。但在生物法中，辅酶和酶 的价格昂贵，提纯工艺复杂。直接利用微生物活细胞作为生物催化剂与以单一酶作为催化剂相 比有很大的优越性：一方面，微生物细胞具有完整的辅酶再生系统，可以在添加共底物情况下 方便地实现辅酶再生；另一方面，直接利用微生物全细胞不需要分离纯化酶，大大地节约了成 本。本文从实验室保藏的七株酵母菌株出发，筛选出具有较高产物得率和e.e.值（对映体过量值） 的酵母菌株——木兰假丝酵母，并对木兰假丝酵母菌株生物转化条件进行优化，提高手性选择 性和产物得率。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试剂 COBE和 S-CHBE标准品购自 ACROS公司，其它试剂均为分析纯。 1.1.2 菌种 实验菌种为本实验室保藏的酵母菌株。 1.1.3 培养基 斜面培养基(g/L)：葡萄糖 10, 酵母膏 3, 蛋白胨 5，麦芽汁 10 琼脂 20； 种子和发酵培养基(g/L)：葡萄糖 10, 酵母膏 3, 蛋白胨 5，麦芽汁 10 ； 1.2 方法 1.2.1 培养方法