实验四 微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定.ppt

实验四 微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数 主要实验内容： 一 显微镜下细菌细胞大小的测定 1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告 二 血球计数板测定微生物细胞的数量 1 实验目的 2 实验原理 血球计数板的结构 计数方法 3 实验材料 实验方法步骤 实验报告 * * 显微镜下细菌细胞大小的测定 血球计数板测定微生物细胞的数量 （显微镜下直接计数） 1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 实验方法步骤 5 实验报告 学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法★ 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小 的方法★★ 巩固显微镜油镜的使用方法 测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测微尺进行。测微尺可分为目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺是特制的圆形玻片，中央有一刻度尺（100等分），可放入目镜镜筒内，用于测定细胞大小。镜台测微尺为一载玻片，上贴有圆形盖片，中央有总长度为1mm(100等分)，每小格长0.01mm (10um) 。目镜测微尺每小格大小随显微镜放大倍数不同而改变，使用目镜测微尺进行测量之前必须用镜台测微尺标定，以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每小格所代表的长度，然后用标定好的目镜测微尺进行测量。 枯草杆菌标本片 （1）用镜台测微尺标定目镜测微尺。 （2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小。 （1）用镜台测微尺标定目镜测微尺。 放置目尺：取出目镜，旋开接目镜，将目尺放在目镜镜筒的中间隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目镜，并插入镜筒。 放置台尺：将台尺放置于显微镜的载物台上，使刻度面朝上。 标定目尺：先用低倍镜观察，找到台尺刻度，转动目镜使目尺与台尺的刻度轴线相平行，移动台尺使目尺与台尺某一区间的两对刻度线完全重合，然后计数出两重合线间各自所占格数，通过如下公式计算： 目尺每小格长度（um）= 两对重合刻度线之间台尺所占格数×10 两对重合刻度线之间目尺所占格数 标定低倍镜目尺每小格所代表的实际长度 （2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小 取下台尺，将染色片放在载物台上，先用低倍镜观察，后换油镜观测，计量细菌长和宽所占小格数，将测得格数乘以已标定的目尺每小格长，即得菌体实际大小。测定20个菌体求出平均值。 （1） 目镜测微尺标定结果记录 0.5um × × 100 油镜 低倍镜 目镜测微尺每格代表长度（um） 镜台测微尺格数 目镜测微尺格数 物镜放大倍数 物镜 （2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录 平均值 平均值 菌体长（um） 菌体宽（um） 目尺格数 目尺格数 20 5 4 3 2 1 菌体大小 （平均值） 宽 ×长（um） 长 宽 菌体编号 …. 1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告 掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。 它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三个平台，中间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两部分，每一部分均有一个方格网，每一方格网可分为九个大方格，中央大方格就是计数室。大方格分为16个中方格，每个中方格又可分为25个小方格。每个大方格共含有400个小方格。计数室大方格边长为1mm，底面积为1mm2，高0.1mm,所以每个计数室固定容积为0.1mm3。 在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位计数左上、左下、右上、右下等四个中方格（100个小方格）所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数的平均值， 计数室每个小方格容积为： 0.1×10-3÷400＝1／4×10-6　(ml) 计算公式： 每ml菌液含菌数 = N ×K ×d (N：每个小方格含菌数平均值；　 d：菌液稀释倍数； K　=　4×106) 稀释100倍的酵母菌菌悬液 即 d=100 1 镜检计数室：对计数室进行镜检，若内有污物，清洗后才能计数。 2 加样液：先在血球计数板两个计数室部位加盖玻片，再用无菌玻棒或滴管沾取待测菌悬液稀释液（已摇匀），从盖玻片边缘滴加，使菌液沿缝隙靠毛细作用自行进入计数室内。静置5min。 3 显微镜计数：将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜观察，后换高倍镜观察计数。位于格线上菌体只计上边线和左边线上的，如果出芽酵