演示文稿1基因工程的基本操作精选.ppt

1.1 DNA重组技术的基本工具 概述：切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。现在已分离出约4000种限制酶。限制酶能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列。 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 1.酶的种类： 作为基因工程运载体的条件 （2009高考-理综 山东） 35. 人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疾苗生产和抗体制备的流程之一如下图： 请回答： （1）过程①代表的是 。 （2）过程②构建A基因表过载体时，必须使用 和 两种工具酶。 （3）过程③采用的实验技术是 ，获得的X是 。 （4）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图 中基因工程生产的 所制备的疫苗。对该 传染病疑似患者确诊时，可以疑似患者体内分 离病毒，与已知病毒进行 比较；或用图中 的 进行特异性结合检测。 参考答案： （1） 逆转录 （2） 限制性核酸内切酶（限制酶\限制性内切酶） DNA连接酶（两空可以互换） （3） 细胞融合 杂交瘤细胞 （4） A蛋白 核酸（基因）序列 抗A蛋白的单克隆抗体 3、将目的基因导入受体细胞 方法： 将目的基因导入植物细胞： 农杆菌转化法（双子叶植物和祼子植物）、基因枪法（单子叶植物）、花粉管通道法 将目的基因导入动物细胞 显微注射法 将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 4、目的基因的检测与鉴定 鉴定：（个体水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 4、目的基因的检测与鉴定 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 形成DNA分子片段 形成DNA分子片段 形成DNA分子 结果 碱基互配对 碱基互配对 碱基互配对 遵循原则 需要 不需要 不需要 载体 限制酶、连接酶 耐高温DNA聚合酶 解旋酶、 DNA聚合酶 酶 细胞内 生物体外 细胞核或细胞器 场所 基因克隆 PCR技术 DNA复制 DNA复制、PCR技术与基因克隆的比较 三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 根据已知氨基酸合成DNA法 反转录法 鸟枪法 缺点 优点 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性最强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 目的基因转移 转化或感染 合成基因 组织、器官、细胞 基因组DNA cDNA文库 基因文库 目的基因的克隆 基因工程的基本操作程序 第二步： 基因表达载体构建 （二）基因表达载体的构建——核心 （二）基因表达载体的构建——核心 1.作用 （二）基因表达载体的构建——核心 1.作用 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 （二）基因表达载体的构建——核心 1.作用 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 （2）同时使目的基因能表达和发挥作用 （二）基因表达载体的构建——核心 1.作用 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 （2）同时使目的基因能表达和发挥作用 2.组成 （二）基因表达载体的构建——核心 1.作用 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 （2）同时使目的基因能表达和发挥作用 2.组成 （二）基因表达载体的构建——核心 1.作用 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 （2）同时使目的基因能表达和发挥作用 2.组成 目的基因 启动子 终止子 标记基因 （二）基因表达载体的构建——核心 3.构建过程 （二）基因表达载体的构建——核心 3.构建过程 ①用一定的________切割质粒，使其出现一 个切口，露出_________。 ②用____________切断目的基因，使其产生 _________________。 ③将切下的目的基因片段插入质粒的______ 处，再加入适量____________，形成了一个 重组DNA分子（重组质粒） （二）基因表达载体的构建——核心 3.构建过程 ①用一定的________切割质粒，使其出现一 个切口，露出_________。 ②用____________切断目的基因，使其产生