常见抗生素氯霉素的高效毛细管电泳-电导分离检测.doc

常见抗生素氯霉素的高效毛细管电泳－电导分离检测 曾暖茜 谢天尧( 中山大学 化学与化学工程学院， 广州 510275 摘要 在熔融石英毛细管（50?m×50cm）中，以6mmol/LH3BO3+2mmol/L硼砂+0.02%TEPA(四乙烯五胺)为电泳运行介质，分离电压-15.0kV，采用毛细管电泳/电导检测法在4min内实现了氯霉素的分离检测。讨论了电渗流抑制剂的浓度、缓冲体系的种类和浓度等因素对检测结果的影响。线性检测范围为1～120mg/L，检出限为0.3mg/L。对市售氯霉素滴眼液和注射液中的氯霉素含量进行分析，加标回收率为93.8～106.8%。 关键词 毛细管电泳 电导检测 氯霉素 引言 氯霉素是一类1-苯基-2氨基-1丙醇的二乙酰胺衍生物C11H12Cl2N2O5，其结构式为： 氯霉素是一类广谱抗生素。对大多革兰氏阴性和阳性菌有效，而对革兰氏阴性菌作用较强，但具有抑制骨髓造血系统，可致再生障碍性贫血另外长期用药还会促发视神经炎，严重时可导致失明。因此氯霉素只在对其他抗生素耐药或不得不使用的严重病例中选用中国农业部已将氯霉素从2000年版《中国兽药典》中删除列为禁药。国家质检总局禁止在出口水产品的饲料、养殖(包括环境、器械等的消毒)、加工、保鲜、包装和运输等生产环节使用氯霉素2002年1月，美国食品与药品管理局（FDA）公布了禁止在进口动物源性食品中使用氯霉素欧盟的进口食品卫生标准规定“氯霉素含量标准为不得检出”[1]2]、酶联免疫法[3]、薄层色谱法[2]、高效液相色谱法[4]等。最近有文献报道采用毛细管电泳正高压分离-紫外检测氯霉素[5]，但分析时间较长。本文报道采用毛细管电泳－电导检测法（CE-CD）mmol/LH3BO3+2mmol/L硼砂+0.02％TEPA(四乙烯五胺)为电泳运行液，分离电压-15kV，在4min内实现了氯霉素的分离检测，应用于市售药品氯霉素滴眼液和氯霉素注射液中氯霉素含量的测定，取得满意结果。 2 实验部分 2.1仪器与试剂 CES2003毛细管电泳仪（高压电源，电导检测器，毛细管电泳数据工作站，中山大学化学与化学工程学院研制）；石英毛细管（50cm×50?m i.d.,河北永年光导纤维厂）；CQ-2B型超声波清洗器（明珠电器有限公司）。 硼酸（H3BO3）、硼砂(Na2B4O7·10H2O)、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、磷酸二氢钾（KH2PO4）、邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）、四乙烯五胺。氯霉素标准品（中国药物生物制品检定所），氯霉素滴眼液（8mL:20mg，芜湖三益制药有限公司），氯霉素注射液（2mL:0.25g，天津药业集团新郑股份有限公司）。 所用试剂均为分析纯；水为二次去离子石英重蒸水。 2.2 缓冲溶液和样品溶液的配制 硼酸，硼砂各配成0.1mol/L溶液；四乙烯五胺配成2%（体积比）水溶液备用。实验时，按比例各取适量以配得不同浓度电泳运行缓冲液。氯霉素标准品配成200mg/L储备液。 2.3实验方法 连接好毛细管电泳仪和检测装置[6]，毛细管柱在使用前依次用0.1mol/L NaOH,蒸馏水和运行液各冲洗约5min。更换运行液后也需按上述步骤清洗毛细管。检测电极用超声波进行冲洗。采用电动进样方式，进样电压-9.0kV，进样时间10s，分离电压-15.0kV。实验在室温（25℃），湿度﹤75% 的实验条件下进行。 3 结果与讨论 3.1电渗流抑制剂的选择 本实验采用未涂层毛细管为分离通道，负高压分离，阳极端检测。由于电渗的方向与阴离子的电泳方向相反，且常大于阴离子的电泳速度。因此，要高效快速地分离检测阴离子各组份，需要抑制电渗流，使其减小甚至反向。四乙烯五胺含有很高的正电荷密度，其氨基(NH3＋)可与毛细管壁的硅羟基(SiO-)通过静电作用结合，有效抑制电渗流[7]。 本实验考察了在硼酸-硼砂缓冲液中，加入不同浓度的四乙烯五胺对氯霉素出峰时间的影响，结果表明，加入0.002%的四乙烯五胺已经可以大大降低电渗流，达0.01％后基本趋于稳定，继续增加浓度到0.2%电渗仍不反向，结果见图Ⅰ。 图Ⅰ. 四乙烯五胺浓度对氯霉素迁移时间的影响 Fig.Ⅰ effect of the conc. of TEPA on the migration of chloramphenicol 电泳运行缓冲溶液(Running buffer):6mmol/LH3BO3+2mmol/L硼砂+ 0.02％四乙烯五胺，分离电压(separation voltage):-15kV, 电动进样(Electrokinetic injection):–9kV×10s， 电导检测(Conductivity Detection)。 3.2 缓冲体系及其浓度的影响