基于层层自组装技术的纳米电化学传感界面构建及其免疫应用.pdfVIP

第4l卷 2013年12月 分析化学(FENXI HUAXUE)研究报告 Chinese Journal of Analytical Chemistry 第12期 1795～1800 DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．30563 基于层层自组装技术的纳米电化学传感界面构建及其免疫应用 张立 范丽霞 梁汝萍+ 邱建丁 (南昌大学化学系，南昌330031) 摘要将壳聚糖．二茂铁／多壁碳纳米管复合物(CS．Fc／MWNTs)与金纳米粒子(Au NPs)通过层层自组装 (LBL)技术固定于3一巯基丙烷磺酸钠盐(MPS)修饰电极表面，形成的三维多层网状结构增加了电极表面的活 性位点，可高效吸附抗体，从而制得免标记的电化学免疫传感界面。以乙肝表面抗原(HBsAg)为例对传感器 的性能进行考察，结果表明，传感器对HBsAg检测的线性范围为0．1—350斗g／L，检出限为0．037斗g／L。免疫 传感器对不同浓度HBsAg的测定结果与ELISA法测得数据的相对偏差在-4．5％～8．3％之间，表明此免疫感 器对HBsAg测定的可靠性高，适用于临床样品的检测。 关键词 安培免疫传感器；层层自组装技术；壳聚糖一二茂铁；多壁碳纳米管；金纳米粒子 1 引 言 电化学免疫传感器是基于测量电流／电位的变化来进行免疫分析的生物传感器，在临床医学、环境 和食品工业等领域有重要应用，并以其体积小、专一度强、灵敏度高、检测快速和成本低等优点，成为当 前研究的热点之一¨’2 J。然而，如何将生物活性组分牢固、有效、稳定地固定于电极表面并保持其良好的 生物活性是研究和开发性能优良的电化学免疫传感器的重要工作。常用的生物分子固定方法主要有直 接吸附法∞J、共价交联法Hj、包埋法H1等，这些方法在生物分子的活性保持以及传感器的使用寿命和灵 敏度等方面仍面临着巨大挑战。因此，发展新型的生物传感器制备方法，实现生物分子在传感界面的高 效而稳定地固定并保持其生物活性，仍是当前的研究重点。 层层自组装(LBL)技术具有组装过程及膜厚度可控等优点，近年来受到广泛关注。相比于分子白 组装单层膜，多层膜上所负载生物分子的量可以成倍增加，有利于传感器分析性能的提高。许多生物分 子，如葡萄糖氧化酶、血红蛋白、肌红蛋白和抗原抗体等可以利用此方法组装到电极表面，并且在生物膜 内保持了良好生物活性∞，7I。本研究采用LBL技术构建了壳聚糖一二茂铁／多壁碳纳米管／金纳米粒子 (CS．Fc／MWNTs／Au NPs)多层膜，该多层膜具有优良的可控性、生物相容性、传导性和氧化还原活性，多 层膜内的MWNTs不仅增大了电极的比表面积，还使Fc与电极表面紧密接触，加速了电子在电极表面 的交换，增强了Fc在电极表面的电流响应旧，9 J，Au NPs的存在显著提高了抗体在电极表面的负载密度、 有效防止了固定化抗体的泄露并保持其生物活性¨0’111。以乙肝抗体(HBsAb)和乙肝抗原(HBsAg)为 模型，对免疫传感器的性能以及影响免疫传感器性能的因素。结果表明，本方法构建的免疫传感界面对 HBsAg的响应速度快、灵敏度高、特异性强，将其用于对临床样品的检测，获得满意结果。 2实验部分 2．1仪器与试剂 壳聚糖(cs，脱乙酰度85％)，甲酰基二茂铁(FcCHO，98％)，氯金酸(HAuCl。·4H：O)，3一巯基丙烷磺 酸钠盐(MPS)和牛血清白蛋白(BSA)购于Sigma—Aldrich公司；多壁碳纳米管(MWNTs，长度为5—15岬， 外径10～20 am，纯度大于90％，比表面积约为40～300 m2／g)购于深圳纳米港有限公司；乙型肝炎表面抗 体(HBsAb)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)购于上海科华生物有限公司。实验用水为二次去离子水。 电极表面形貌用扫描电镜(Quanta 200，美国FEI公司)表征。电化学实验在Autolab PGSTAT30电 2013-06．13收稿；2013-10-06接受 本文系国家自然科学基金21265012)和教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET．11．1002)项目资助 }E—mail：rpliang@ncu．edu．ca 万方数据 分析化学 第41卷 化学工作站(Eeo Chemie公司)上进行，采用三电极体系：以修饰的金电极(Au，d=2 mm)为工作电极， Ag／AgCI(饱和KCl溶液)为参比电极，铂丝为对电极。伏安测试在pH 7．4的PBS溶液中进行，扫描速 率为50 mV／s，电化学交流阻抗(EIS)测试条件为：频率范围10。2—105 Hz，正弦波电位振幅为5．0 mV， 在pH 7．4的PBS缓冲液(含0．1 mol／L KCl和5．0 mmol／L Fe(cN)。3-／4-)中测定，记录复平面图 (Nyq