离子色谱抑制型电导检多肽中的氟乙酸.docVIP

离子色谱-抑制型电导检多肽中的三氟乙酸 曾雪灵 戴安中国有限公司，杭州，310028，zengxueling@ 摘要：在本文采用离子色谱抑制型电导快速测定多肽中的伊三氟乙酸及其它离子的含量。采用Ionpac AG14+ AS14阴离子分析柱分离，以电导为检测器。用去离子水提取多肽中的三氟乙酸及杂质离子。实验结果表明，在一定的色谱条件下，三氟乙酸及其杂质离子具体很好的线性，和重现性，及较低的检出限。最低检出量及样品的平均加标回收率均符合分析的要求。 关键词：离子色谱；多肽；三氟乙酸 三氟乙酸（TFA）常用于制造过程中，从固相树脂洗脱出合成肽。三氟乙酸或乙酸也被 用于肽的反相高效液相色谱纯化过程。三氟乙酸由乙酸和氟化物反应合成，因此三氟乙酸中 存在乙酸和氟化物的残留。残留的三氟乙酸，氟化物以及乙酸对人体有毒，因此不应存在于 临床使用前后的肽中。测定三氟乙酸，乙酸和氟化物对于肽的形成是合适的，这样能在制造 过程中查证这三种阴离子是否已被消除掉。 在之前的文献报导中采用气相色谱1-5，GC-MS6，反相HPLC7，电泳8-10，红外11，滴定12-13，分光光度法14检测TFA。在本文中采用离子色谱法检测肽样品中的三氟乙酸，氟化物以及乙酸。实验结果表明，离子色谱方法具有简便，速度快以及灵敏度高的优点。 1．实验部分 1.1 仪器 DX-500包括：GP40梯度泵；CD20电导检测器或ED40电化学检测器；LC30或LC20；AS3500自动进样器。 1.2 试剂 所有试剂均为分析纯。标准溶液均由1000mg/L的贮备液（置于4℃冰箱中）稀释配制， 溶液均用18.2MΩ.cm 的二次去离子水配制。 1.3 色谱条件 柱：IonPac AS14（4mm），AG14（4mm）；淋洗液：3.5mM Na2CO3／0.8 mM NaHCO3；流速：1.2mL／min；进样体积：10uL；检测器：抑制型电导检测，ASRS自动抑制循环模式和外加水模式。中国色谱网 1.4 样品前处理 将市售肽样品用淋洗液溶解为1mg／mL。生产过程中的肽样品亦用淋洗液溶解，干燥固体浓度为1mg/mL。两种样品都要用淋洗液做进一步稀释，至浓度分别为40ug/mL和400ug/mL。 2．结果与讨论 2.1方法的线性范围、精密度和最低检测限 在所选的色谱条件下，各种待测离子分离度大于1.50，能够很好地保证定量和定性。 考察方法的稳定性是通过测定连续12针同一样品的各指数的相对标准偏差RSD。F，乙酸以及三氟乙酸的峰保留时间的RSD分别为0.4％、0.4%, 0.3%；峰面积的RSD值分别为0.5％，2.3％，3.8%。 2.2 样品测定和回收率测定 2.2.1回收率测定 表3为从商品肽样品中提取氟，乙酸以及三氟乙酸样品的回收率。阴离子是采用标准加入法添加到肽样品中。氟离子加标回收率的范围为93-100%，乙酸的加标回收率的范围为 79-106%，而三氟乙酸的加标回收率的范围为91-106%，符合分析测试的要求。 2.2.2 商品化肽样品中残留的离子 表4为商品化肽样品中氟，乙酸，以及有三氟乙酸离子含量的值。除了目标的检测到的 三种离子外，在所有的肽样品中亦检测到了其它的离子如氯，硫酸根，磷酸根以及硝酸根。 此方法可同时检测这几种离子。 3 结论 在本文中以IonPacAS14柱为分离柱，等度分离，抑制型电导检测即可完成对肽中TFA、 氟化物和乙酸的测定，同时分离了其它常见阴离子，如Cl-，SO42-，NO3-和PO43-。TFA， F-和AC-可检测到mg/L级。回收率均大于90％。 参考文献 1. Both, D. A.; Jemal, M. J. Chromatogr. 1992, 596, 85–90. 2. Mariorino, R. M.; Gandolfi, A. J.; Sipes, I. G. J. Anal. Toxicol. 1980, 4, 250–254. 3. Dimitrieva, T. M.; Koemets, L. A. Prod. Khim. Promsti. 1979, 2, 9–11. 4. Witte, L.; Nau, H.; Fuhrhop, J. H. J. Chromatogr. 1977, 143, 329–334. 5. Karashima, D.; Shigematsu, A.; Furukawa, T.; Nagayoshi, T.; Matsumoto, I. J. Chromatogr. 1977, 130, 77–86. 6.