专题1基因工程综述.pptVIP

蛋白质工程的进展和前景 蛋白质工程目前的现状：成功的例子不多，主要是因为蛋白质发挥其功能需要依赖于正确的空间结构，而科学家目前对大多数蛋白质的空间结构了解很少。 蛋白质工程汇集了当代分子生物学等学科的一些前沿领域的最新成就，它把核酸与蛋白质结合、蛋白质空间结构与生物功能结合起来研究。蛋白质工程将蛋白质与酶的研究推进到崭新的时代，为蛋白质和酶在工业、农业和医药方面的应用开拓了诱人的前景。蛋白质工程开创了按照人类意愿改造、创造符合人类需要的蛋白质的新时期。 名称 ?原理 ?方法 优点 ?缺点 应用 杂交育种 ?基因重组 培育纯合子品种：杂交→自交→筛选出符合要求的表现型，自交到不发生性状分离为止（纯合化） 使分散在同一物种不同品种中的多个优良性状集中于同一个体上，即“集优” ? (l)育种时间长 (2)局限于同一种或亲缘关系较近的个体 ?用纯种高干抗病小麦与矮杆不抗病小麦培育矮杆抗病小麦 ?培育杂种优势品种：一般是选取纯合双亲杂交 年年制种 杂交水稻、玉米 诱变育种 ? 基因突变 ?①物理：紫外线、X射线，微重力、激光等处理，再筛选；②化学：亚硝酸、硫酸二乙酯处理，再选择 提高变异频率，加快育种进程，大幅度改良某些性状 ?有利变异少，需大量处理实验材料（有很大盲目性） 高产青霉菌，“黑农五号”大豆品种等的培育和高产雄性家蚕的培育 单倍体育种 染色体数目变异 ?①先进行花药离体培养出单倍体植株；②将单倍体幼苗经一定浓度的秋水仙素处理获得纯合子；③从中选择优良植株 ??明显缩短育种年限，子代均为纯合子，加速育种进程 ?技术复杂且需与杂交育种配合 ?用纯种高杆抗病小麦与矮杆不抗病小麦快速培育矮杆抗病小麦 多倍体育种 染色体数目变异 ?用一定浓度的秋水仙素处理萌发的种子或幼苗 ?操作简单，能较快获得所需品种 ?所获品种发育延迟，结实率低，一般只适用于植物 三倍体无籽西瓜、八倍体小黑麦 转基因育种 ? 基因重组 提取目的基因→装入运载体→导入受体细胞→目的基因的表达与检测→筛选出符合要求的新品种 目的性强；育种周期短；克服了远缘杂交不亲和的障碍 ?? 技术复杂，安全性问题多 ?转基因“向日葵豆”、转基因抗虫棉 * 即当限制性内切酶作用于特定的DNA时，把这段序列沿着特定的切点切开的这个过程分两种情况：a、沿着中轴线切口（即沿着DNA双链中对应的磷酸二酯键）切开，得到的就是两个平末端；b、在中轴线的两端切口切开，得到的就是两个黏性末端。例如：EcoRⅠ限制性内切酶就可以识别G/AATTC的DNA序列，然后在G和A间切开，得到的就是两个黏性末端（之间可以根据碱基互补配对原则重组）限制酶的切口不都是一长一短的，一长一短的叫黏性末端，一样长的叫平末端。“粘性末端”在高中教材中也作“黏性末端”。如图： 1 一般性状 分子质量为60 kD，单链多肽，最适pH为6～8； NaCl有抑制作用，能被Mg2+激活，巯基有保护作用， 对热不稳定，通常是溶于含有50％甘油的缓冲液中贮存于–20℃环境下。取出使用时必须立即置于冰浴中。 2 识别序列 它对底物要求有特异的序列，通常的识别序列是4 bp ～6bp，有些则为7bp～8bp，甚或多于8bp。 多数限制酶的识别序列为回文结构，在识别序列内或其附近水解DNA链中的磷酸二酯键。 * * 两类文库的构建方法和目的的不同决定了其基因的分离和提取难易度不同. 基因组文库的部分基因（特别是不能表达形成mRNA的非酶切部分）很难通过某种方法从基因组文库中分离出来,从而影响了它们在物种间交流的可能性. cDNA的基因中没有内含子、启动子和终止子.（最关键的原因） 基因工程中,如果用原核生物作为受体细胞,目的基因是来自真核生物的基因组文库的基因,真核生物的基因组文库的基因含有内含子,在原核生物体内没有内含子剪切酶,就不行,如果目的基因来自真核生物的cDNA文库的基因,其基因没有内含子,就可以用. * 变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变： 1）溶液粘度降低。双螺旋成单股线性结构，粘度明显下降。 2）溶液旋光性发生改变。变性后整个DNA分子的对称性及分子局部的构性改变，使DNA溶液的旋光性发生变化。 3）增色效应(hyperchromic effect)。指变性后DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应。DNA分子中碱基间电子的相互作用使DNA分子具有吸收260nm波长紫外光的特性。在DNA双螺旋结构中碱基藏入内侧，变性时DNA双螺旋解开，于是碱基外露，碱基中电子的相互作用更有利于紫外吸收，故而产生增色效应。 * * * * * 免疫化学 immunochemistry 　　以抗体的结构，抗原抗体反应的物理化学分析，补体的结构和作用，各种抗原的化学分析，以