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酵素水溶液在冰冻切片中的应用 　　摘要：目的 分析探讨酵素水溶液在冰冻切片中的应用，探索能提高冰冻切片质量的方法。方法 选用我院临床科室提供的各种系统组织100例，采用抽签分组法分为实验组（n=50）和对照组（n=50）。实验组采用酵素水溶液作为分化液，对照组采用1%盐酸乙醇溶液作为分化液，分析比较两组分化液的使用时间、所制切片质量及其稳定性。结果 实验组的酵素水溶液使用时间明显大于对照组，比较差异有统计学意义（P0.05），酵素水溶液为分化剂制作冰冻切片质量稳定；实验组冰冻切片的质量高于对照组冰冻切片的质量，差异显著，有统计学意义（P0.05）。结论 酵素水溶液作为分化液制作冰冻切片能显著提高切片质量且质量稳定，值得推广使用。 　　关键词：酵素水溶液；分化液；冰冻切片；切片质量 　　冰冻切片作为一种能将新鲜组织在低温环境下快速冷冻至一定程度再进行切片的方法，是病理诊断和进行科学研究的重要手段之一，高质量的冰冻切片能帮助医师快速准确地对患者病情做出评估和判断[1]，为合理的制定治疗方案提供了科学依据。为探索能提高冰冻切片质量的方法，本文研究对比了酵素水溶液和1%盐酸乙醇溶液作为分化液制作的冰冻切片质量，现报道如下。 　　1资料与方法 　　1.1切片组织材料 选取我院临床科室提供的系统组织100例，采用抽签分组法分为实验组（n=50）和对照组（n=50）。实验组组织中包含甲状腺组织14例，乳腺组织17例，淋巴结组织9例，小腿皮肤组织10例；对照组组织中包含甲状腺组织16例，乳腺组织13例，淋巴结组织11例，小腿皮肤组织10例。两组组织来源差异比较无统计学意义，具有可比性（P0.05）。 　　1.2分化液制备 　　1.2.1酵素水溶液制作材料[2] 红糖100g，苹果300g，无菌水1000g于密封容器内混合保存，每天打开容器一次释放发酵产生的气体直至无气体产生，之后静置至水溶液颜色变成棕黄色，调整pH=3～4，再将酵素原溶液与无菌水以1：1质量比混合得到酵素水溶液。 　　1.2.2 1%盐酸乙醇溶液[3] pH=1的盐酸0.5ml与100ml的75%乙醇混合，得到1%盐酸乙醇溶液。 　　1.2.3切片制作[4] 制片前详细了解患者的临床状况和相关的既往病理检查史。选用我院ThermoFisher CC07335C1304冰冻切片机，将切片机预冷至相应温度（乳腺、卵巢等部位温度控制在：-20℃；甲状腺、淋巴结、肾等部位温度控制在：-15℃；皮肤组织温度控制在：-18～℃-20℃），再将新鲜组织按0.3cm厚，1.5cm长切片，切好的组织置于预先放置了包埋剂的组织托上，放入冰冻切片机冻结。冻结好的组织修剪成规则形状，使用切片机将组织分割为5μm厚，取2片切片分别贴附在载玻片并放于甲醇固定液中，固定1min后取出，无菌水冲洗10s。再分别使用两种分化液染色：①1%盐酸乙醇溶液做分化液：切片使用苏木精染色60s后水洗10s，1%盐酸乙醇溶液分化2s后水洗10s，温水返蓝5s，伊红染色3s，水洗，最后使用梯度乙醇脱水，二甲苯、中性树胶封固；②酵素水溶液做分化液：切片使用苏木精染色60s后水洗10s，酵素水溶液分化2s后水洗10s，温水返蓝5s，伊红染色3s，水洗，最后使用梯度乙醇脱水，二甲苯、中性树胶封固。切片使用制片时我院留存的分化液制备。 　　1.3切片质量评价指标[5] ①3级：切片组织背景干净、细胞清晰度高、染色鲜艳、红蓝对比度高。记为3分。②2级：切片的染色鲜艳度偏灰或偏红、细胞清晰度不高、组织背景干净度欠佳、红蓝对比度较差。记为2分。③1级：组织背景较脏，细胞模糊且染色较差，红蓝对比度低，切片无诊断价值。记为1分。切片质量由我院病理科主任评定。 　　1.4分化液使用时间 计算两组溶液可供使用的时间，取平均值计算。 　　1.5统计学 采用SPSS17.0软件对数据进行统计分析，计量资料用x±s表示，采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1比较两组分化液使用时间 实验组酵素水溶液使用一段时间后，表面形成保护膜，去膜之后继续使用，平均使用时间（6.95±1.09）w。对照组1%盐酸乙醇溶液使用一段时间后分化能力下降，共可使用（3.87±0.59）w。实验组的酵素水溶液使用时间明显大于对照组，比较差异有统计学意义（P0.05）。 　　2.2比较实验组组织切片的质量稳定性 实验组甲状腺组织冰冻切片质量评分为（2.01±0.01）分，乳腺组织冰冻切片质量评分为（2.57±0.41）分，淋巴结组织冻切片质量评分为（2.65±0.00）分，小腿皮肤组织冻切片质量评分为（1.57±0.63）分，四种组织冰冻切片质量评分差异无统计学意义（P0.05）。酵素水溶液为分化剂制作冰冻切片质