微生物限度检查作业指导书精要.doc

目的：建立微生物限度检查的标准操作规程，为微生物检验人员提供正确的操作方法。 范围：适用于辅料、内包材料和所有产品的微生物限度检查。 职责：检验人员对本规程的实施负责。 参照标准：GB/T4789.3-2003,GB/T4789.15-2003,GB/T4789.2-2003 内容： 概述 微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。 供试品一般按批号随机抽样；抽样量应为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量（以备复检）。 检验的全过程，均应严格遵守无菌操作，严防再污染。 仪器与用具 恒温恒湿培养箱、生化培养箱、恒温水浴、高压蒸汽消毒锅、电热恒温干燥箱；试管、锥形瓶、量筒、培养皿（Φ90mm）、刻度吸管、研钵；托盘天平或电子天平、镊子、剪刀、酒精灯、打火机、编号笔、75%酒精棉球；拖鞋、无菌衣、裤、帽、口罩。 以上玻璃器皿、镊子、剪刀等洗净、晾干，160～170℃干烤2h，备用。 所有灭菌物品存放于第一缓冲间，不应超过2周即用毕。否则，应重新灭菌。 培养基、试液配制 营养琼脂培养基（细菌用）、孟加拉红培养基（虎红琼脂培养基，霉菌用）， 胆盐乳糖培养基（即BL，用于大肠杆菌增菌培养）、4—甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）培养基（用于大肠杆菌快速检查）、麦康凯琼脂培养基（即MacC，用于肠道菌分离培养）、蛋白胨水培养基（供靛基质试验用）、磷酸盐葡萄糖胨水培养基（供甲基红及VP试验用）、枸橼酸盐培养基（供枸橼酸盐利用试验用）；营养肉汤培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB，沙门菌增菌用）、胆盐硫乳琼脂（DHL）或沙门、志贺菌属琼脂（SS）培养基（用于沙门菌分离培养）、麦康凯琼脂或曙红亚甲蓝琼脂培养基（大肠杆菌及沙门菌分离培养用）、三糖铁琼脂（TSI）斜面培养基（肠道菌初步鉴别用）的配制及灭菌方法参见中国药典2000年版一部附录ⅩⅢC。 0.1%2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）溶液（供制备培养基用）、氢氧化钾试液（供作V–P反应试剂）、α–萘酚乙醇溶液（供作V―P试剂）、靛基质试液。的配制及灭菌方法参见中国药典2000年版一部附录ⅩⅢC。 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液、无菌磷酸盐缓冲液（PH7.2）。 操作过程 试验前的准备 将所有已灭菌的培养皿、锥形瓶、研钵、试管、吸管、量筒、稀释剂及供试品等通过传递窗进入无菌室内