TaKaRaLATaq.pdfVIP

……………………………………………………………………………………………………………………………………… 宝日医生物技术（北京）有限公司 技术咨询电话 网址： 4006518761 4006518769 TaKaRa LA Taq? Code No. RR02MQ 包 装 量：50 Units 附带试剂 10×LA PCR Buffer II（Mg2+ Plus） 1 ml dNTP Mixture（2.5 mM each） 180 μl 贮存溶液 Tris-HCl（pH8.0） 20 mM KCl 100 mM EDTA 0.1 mM DTT 1 mM Tween 20 0.5% Nonidet P-40 0.5% Glycerol 50% dNTP Mixture 可直接用于 PCR，无需稀释。 状 态： 水溶液（钠盐，pH7～9） 纯 度： 每种dNTP≥98% 活性定义 用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在 74℃、30 分钟 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性 单位（U）。 活性测定反应液组成 25 mM TAPS (pH9.3, 25℃) 50 mM KCl 2 mM MgCl2 0.1 mM DTT 200 μM each dATP·dGTP·dCTP 100 μM [3H]-dTTP 0.25 mg/ml activated salmon sperm DNA 纯 度 10 U 的本酶和 0.6 μg 的λ-Hind III、0.6 μg 的 Supercoiled pBR322 DNA或 0.6 μg的λ DNA在 74℃下反应 1 小时，均未检 出内切酶和外切酶活性。 用 途 PCR法扩增 DNA。尤其适用于 15 kb 以上 DNA片段的扩增。 PCR产物 使用本制品扩增得到的大部分 PCR产物 3’端附有一个“A”碱基， 因此可直接克隆于 T-Vector中。但克隆片段过长（大于 5 kb）， TA 克隆效率将会降低。也可以将 PCR 产物进行末端平滑化和磷酸 化后克隆到平滑末端载体中。 PCR反应性能 1） 以λ DNA 为模板，可以很好地扩增 35 kb的 DNA 片段。 2） 以人基因组 DNA为模板，可以很好地扩增 17.5 kb（β-Globin gene）的 DNA片段。 PCR反应液组成（共50 μl） TaKaRa LA Taq（5 U/μl） 0.5 μl 10×LA Taq Buffer II（Mg2+ Plus） 5 μl dNTP Mixture（2.5 mM each） 8 μl Template 1 μg 引物 1 0.2 - 1.0 μM (final conc.) 引物 2 0.2 - 1.0 μM (final conc.) 灭菌水 up to 50 μl PCR反应条件 扩增 17.5 kb DNA 片段的 PCR 反应条件如下： 94℃ 1 min. 98℃ 10 sec. 68℃ 15 min. 72℃ 10 min. 注） 变性条件根据使用的 PCR仪型号和反应管种类进行设定， 94℃时设定为 20～30 sec、98℃时设定为 5～10 sec。 Cool Start法 这种冷启动法（Cool Start Method）可增强 PCR 扩增的特异性， 减少 PCR 过程中的非特异性反应，能得到良好的 PCR 结果。该方 法操作简单，无需专门的酶或附加试剂。 Cool Start法操作过程 1、 使用前将试剂置于冰上。 2、 在冰上准备反应混合液*1，2。 *1：添加顺序不影响结果。 *2：混合液在反应前冰上放置 30 min 不会影响结果。 3、